生物技术通报

植物激素——植物学研究永恒的话题

黎家

2018, 34(7): 0-0.

摘要 ( 199 )

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赤霉素信号转导及其调控植物生长发育的研究进展

高秀华, 傅向东

2018, 34(7): 1-13. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0447

摘要 ( 675 )

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赤霉素（Gibberellins或gibberellic acid,GA）是植物生长发育所必需的植物激素之一,调控植物生长发育的多个过程。近年来随着植物分子生物学和功能基因组学的发展,有关GA信号转导途径及其调控植物生长发育的研究取得了一系列的进展。综述了GA信号转导途径的关键组分,包括GA受体GIBBERELLIN INSENSITIVE DWARF1（GID1）蛋白、F-box蛋白（拟南芥中的SLEEPY1[SLY1]和水稻中的GIBBERELLIN INSENSITIVE DWARF2[GID2]）及DELLA蛋白,阐述了GA去除DELLA蛋白阻遏作用的分子模型,同时探讨DELLA蛋白通过其互作蛋白整合其它激素及环境信号调控植物生长发育的作用机理。

茉莉素与植物生物胁迫反应

吴德伟, 汪姣姣, 谢道昕

2018, 34(7): 14-23. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0442

摘要 ( 306 )

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植物固定生长不能移动,时刻面临着害虫咬噬、病原微生物侵染等多种外界环境胁迫。为了应对这些胁迫,植物进化出了复杂且被精细调控的防御系统,包括利用植物激素调控抗性基因的表达以及抗性相关次生代谢产物的积累等。有趣的是,许多昆虫和病原微生物被发现能够采用各种策略来逃避、克服甚至操控植物防御系统,以促进其对宿主植物的利用。茉莉素是一种重要的脂质植物激素,调控生长发育的诸多方面,同时也在植物应对多种生物胁迫和非生物胁迫的防御反应中发挥重要作用。近年来,茉莉素的生物合成、信号转导和生理功能等均得到了广泛研究,并取得了一系列重要进展。概述了茉莉素的生物合成调控与信号转导途径,同时也探讨了茉莉素对植物生物胁迫反应的调控机制,并介绍了昆虫和病原微生物对植物茉莉素途径的操控策略,以期为深入理解茉莉素介导的植物与病原生物之间的相互作用提供参考。

生长素信号转导研究进展

冯寒骞, 李超

2018, 34(7): 24-30. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0488

摘要 ( 577 )

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植物激素生长素影响植物生长中几乎所有的方面,包括植物细胞的生长、分裂和分化,以及植物从胚胎发育到生殖发育的各个过程中。生长素的研究主要围绕合成与代谢、运输和信号转导而展开。植物细胞对生长素的响应和信号转导主要通过细胞核内的TIR1/AFB-Aux/IAA-ARF信号通路来完成。另外,细胞表面起始的信号通路主要调控生长素的快速响应,而SKP2A通路介导了生长素对细胞周期的调控。概述了三条生长素信号转导通路目前的研究进展,并介绍了生长素信号转导中具体的研究工具。基于该领域的研究现状,提出了生长素信号转导方面有待进一步研究的方向,包括TIR1/AFB-Aux/IAA-ARF复合体的调控机制研究、生长素调控冠部和根部生长的差异性研究、以及对细胞表面起始信号途径的进一步探索。

植物细胞内膜运输对植物发育的调控机制

庞磊, 朱颖, 金中财, 夏曦华, 李瑞熙

2018, 34(7): 31-39. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0360

摘要 ( 263 )

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植物细胞内膜体系与别的真核生物体系相似,由一系列连续的内膜结构组成,包括核膜、内质网、高尔基体、反式高尔基体、液泡、转运囊泡和细胞膜。其中,反式高尔基体和液泡具有植物细胞特有的结构特征和对应功能。从几个方面综述植物细胞内膜运输对植物发育的调控作用,包括内膜运输与生长素极性运输和稳态平衡之间的关系,内膜运输对根毛极性生长的作用机理,以及液泡运输在花粉管极性生长和种子萌发过程中的重要作用。旨在对致力于植物细胞内膜运输与发育调控的研究人员提供参考。

中介体亚基MED25调控植物激素信号转导的研究进展

窦悦, 刘美彤, 卢安娜, 吴佳洁, 王群青, 胥倩

2018, 34(7): 40-47. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0487

摘要 ( 233 )

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由多亚基组成的中介体复合物（Mediator complex）是真核生物转录调控中不可或缺的纽带,它的核心功能就是将基因特异的转录因子和基于RNA聚合酶II的转录机器相连接,形成转录预起始复合物（Pre-initiation complex,PIC）,从而实现特定转录信号的传递。Mediator 25（MED25）是植物中介体复合物的一个多功能亚基,参与调控植物生长发育和抗逆境胁迫等多种复杂的生理过程。MED25可以和多种转录激活子（如MYCs、AP2/ERFs及ARFs等）、转录抑制子（如JAZs和Aux/IAAs等）以及其它中介体亚基（如MED13和MED16等）在蛋白水平上直接互作,调控植物激素茉莉酸（JA）、脱落酸（ABA）、生长素（Auxin）和乙烯（Ethylene）等信号途径以响应各种生物和非生物胁迫。近年来对MED25的靶标分离及功能鉴定已经成为一个热点话题。本文系统介绍了MED25在各激素信号途径转导中的调控作用机制,对深入讨论植物如何启动特定激素信号途径进而调控特定生理过程的分子机制提供新的研究思路。

干旱下植物激素影响作物根系发育的研究进展

郭宾会, 戴毅, 宋丽

2018, 34(7): 48-56. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0425

摘要 ( 291 )

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植物激素是指在植物体内某些部位合成、可被运输到其他部位调控植物生长发育的微量有机物质,在植物生命活动中发挥重要作用。根系是作物吸收水分和养分的重要器官,其形态决定了作物获得养分和水分的能力。作物发达的根系与其抵抗干旱环境胁迫息息相关,而植物激素在作物根系发育中发挥关键作用,因此深入了解干旱胁迫下植物激素对作物根系发育的影响对农业的安全生产是至关重要的。本文就干旱胁迫下植物激素如何调控及不同激素协同调控作物根系生长发育的研究进行了概述,并讨论了激素在作物抗旱上应用的意义及将来可能开展的研究方向。

拟南芥热形态建成中PIF4下游基因研究

汪硕, 丁岚, 刘建祥, 韩佳嘉

2018, 34(7): 57-65. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0211

摘要 ( 364 )

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植物细胞伸长是植物生长和形态建成的主要方式之一,受到激素和环境信号等许多因素调控,而光敏色素PHY B互作蛋白PIF4可以促进植物在环境温度升高后的形态建成即热形态建成,但PIF4在这个响应过程中全基因组水平调控的下游基因未见报道。本研究进一步通过遗传实验证明PIF4在热形态建成中发挥着重要的作用。通过RNA-Seq实验分析得到热形态建成中248个PIF4依赖的和21个PIF4部分依赖的下游基因,包括生长素信号通路和非生物逆境响应基因。结合已有CHIP-Seq数据得到74个热形态建成中PIF4结合靶标基因。拟南芥热形态建成过程中PIF4下游基因的研究为更好理解植物对环境温度升高的响应奠定了基础。

GA与B9对马铃薯种薯生长发育的影响

何依雪, 刘文, 沈祥陵

2018, 34(7): 66-73. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0023

摘要 ( 226 )

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马铃薯是全球第四大粮食作物,具有较高的经济价值。其中,马铃薯种薯是马铃薯育种和繁殖的重要研究部分,对马铃薯研究和应用具有重要的意义。为了探究赤霉素（Gibberellin,GA）与丁酰肼（B9）对马铃薯种薯生长发育的影响,采用不同浓度的赤霉素与丁酰肼进行正交实验,最后通过对马铃薯的株高、侧芽、叶片、种薯数量以及种薯淀粉含量的统计。结果显示,GA与B9同时添加对马铃薯种薯的生长发育有明显的影响,对种薯数量和质量的影响显著大于单方面施加GA或B9。其中添加0.5 mg/L的GA与20-40 mg/L B9的培养基有助于形成叶片宽大,茎秆粗壮,种薯数量多,种薯淀粉含量高的马铃薯。

蔗糖,GA与液体培养基对马铃薯块茎形成的影响

何依雪, 刘文, 沈祥陵

2018, 34(7): 74-80. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0355

摘要 ( 204 )

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马铃薯是全球第四大粮食作物,粮菜兼用,有丰富的营养价值。马铃薯块茎是马铃薯最具经济价值的部分。马铃薯块茎形成的过程受多种调控途径的调控,其中最重要的是蔗糖途径和赤霉素（GA）途径。本实验设计蔗糖浓度,GA浓度和培养基类型3个因素的正交试验,通过对马铃薯的结薯时间,结薯数,马铃薯均重和大薯率的统计发现高浓度的蔗糖能够使马铃薯结薯提前,液体培养基能够增加马铃薯的薯重和大薯率。添加8%蔗糖和0.1 mg/L GA的液体MS培养基能够使马铃薯提前结薯并且得到的马铃薯数量多,薯重大。

茉莉酸甲酯对丹参毛状根有效成分含量的影响

熊丙全, 刘冬青, 廖相建, 郑雪莲

2018, 34(7): 81-84. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-1001

摘要 ( 214 )

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研究茉莉酸甲酯对丹参毛状根中次生代谢产物含量的影响,为丹参毛状根培养的生产应用提供实验依据。以茉莉酸甲酯作为丹参毛状根的诱导子,进行丹参毛状根诱导培养。发现茉莉酸甲酯诱导的丹参毛状根的丹参酮类化合物丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A分别是无茉莉酸甲酯诱导的1.53倍和1.16倍,酚酸类化合物迷迭香酸和丹酚酸B分别是无茉莉酸甲酯诱导的1.37倍和4.43倍。茉莉酸甲酯能显著提高丹参毛状根次生代谢产物的合成和积累,通过茉莉酸甲酯诱导实现丹参有效次生代谢产物的高效生产。

水杨酸和霜霉病诱导黄瓜PCD过程中线粒体相关基因的表达分析

王丹丹, 迟春宁, 白晶, 陈冲, 池春玉, 丁国华

2018, 34(7): 85-91. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0471

摘要 ( 220 )

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为研究水杨酸（SA）和霜霉病两种处理诱导黄瓜PCD过程中线粒体相关基因的表达差异及其引发的黄瓜叶片PCD发生方式。选择长出4片真叶的黄瓜植株为试材,用10 mmol/L SA处理叶片,用5×10⁵-10×10⁵个孢子囊/mL的霜霉菌菌液接种叶片,分别取SA处理0、3、12和24 h及接种菌液0、36、72和96 h的叶片提取RNA,用qRT-PCR技术分析16个线粒体相关基因的表达动态。实验结果表明：16个基因在SA处理和霜霉病接种后都表达,呈现相似或相悖的表达趋势,说明SA诱导的PCD相关基因与霜霉病诱导的PCD信号通路有明显的相互联系,其中11个基因在霜霉病处理中结果与SA处理相似皆为上调,5个基因在SA处理中为上调表达,在霜霉病处理过程中却是下调表达,这也表明SA和霜霉病引发抗病信号途径存在差异,从而使黄瓜叶片PCD发生方式不同。通过查找文献分析16个基因的功能及研究现状,这些基因属于4个功能类群,主要包括参与线粒体膜转运、细胞呼吸作用、蛋白质合成、折叠和转运、线粒体信号转导以及其他或未知功能。

转Bt基因抗虫玉米HGK60的农艺性状分析

梁海生, 李梦桃, 李圣彦, 汪海, 张杰, 郎志宏

2018, 34(7): 92-100. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0219

摘要 ( 228 )

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为了确定转Bt cry1Ah抗虫玉米HGK60的自交系及其杂交后代外源基因的遗传表达稳定性和农艺性状,通过实时荧光定量PCR和ELISA分析外源基因的遗传表达稳定性,通过室内外生测和田间性状考量分析农艺性状。荧光定量PCR结果表明Bt cry1Ah基因在玉米的不同组织中可以正常转录,但RNA表达水平存在一定的差异;ELISA结果表明在转基因植株的不同发育时期、不同器官中Cry1Ah的蛋白表达量顺序：雄穗>叶片>苞叶>籽粒>花丝>穗轴。两地连续三代的田间及室内抗虫性检测结果表明HGK60抗虫玉米对亚洲玉米螟均表现出很好的抗性。性状考量结果表明HGK60抗虫玉米与受体材料对照比较,种子发芽率、生育期、穗行数、穗长、千粒重等农艺性状均无显著差异。通过多年多点田间试验和分子检测结果证明HGK60转基因抗虫玉米中外源基因稳定的遗传和表达,对亚洲玉米螟有很好的抗性,农艺性状与对照材料无显著差异。HGK60转基因抗虫玉米对亚洲玉米螟的良好抗性使其具有很好的产业化应用前景。

蒺藜苜蓿MtLEA5B的克隆和功能分析

张业猛, 沈迎芳, 王英芳, 姚品雅, 王海庆

2018, 34(7): 101-107. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0095

摘要 ( 233 )

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胚胎发育晚期丰富蛋白（Late embryogenesis abundant protein,LEA protein）是一类参与植物抗逆性应答的亲水蛋白。旨在揭示异源表达LEA蛋白在非生物胁迫条件下对宿主的保护作用。从蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）幼苗中克隆到一个编码LEA_5蛋白的基因,命名为MtLEA5B,通过半定量RT-PCR分析MtLEA5B的表达模式。利用SDS-PAGE蛋白电泳检测重组蛋白的耐热性和可溶性。构建原核表达载体,转化大肠杆菌过表达,检测大肠杆菌的生长存活情况。MtLEA5B的表达模式受到低温（4℃）、脱水、150 mmol/L NaCl胁迫和ABA处理的调控。SDS-PAGE蛋白电泳出现一条相比理论预测值较大,且沸水条件下可溶性未降低的条带。在大肠杆菌中过表达MtLEA5B蛋白能明显提升宿主菌在高温（55℃）和冷冻（-20℃）条件下的生存率。MtLEA5B是诱导性表达基因;MtLEA5B蛋白具有较高的亲水性和耐热性。在大肠杆菌中过表达可以明显提升其对温度胁迫的耐受性。

盐芥EsABCG25的克隆及其表达分析

松布尔巴图, 陈悦, 陈宁美, 唐帅, 徐小静

2018, 34(7): 108-118. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0020

摘要 ( 276 )

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旨在揭示盐芥（Eutrema salsugineum）ABCG25的结构及其对干旱、盐害以及温度等胁迫的响应。以山东生态型盐芥作为材料,通过电子克隆以及RT-PCR技术,获得一个腺苷三磷酸结合盒转运蛋白G（ABCG）家族成员基因的全长cDNA序列,命名为EsABCG25,GenBank登录号为KY111263。EsABCG25全长2 154 bp,含1 983 bp的开放阅读框,编码一个含有660氨基酸的蛋白分子。该基因定位于盐芥第5染色体,含有4个外显子和3个内含子。EsABCG25蛋白具有一个核苷酸结合结构域（NBD）和一个跨膜结构域（TMD）,与来源于同科植物芜菁的ABCG25亲缘关系最近。对高通量测序数据分析表明该基因在盐芥的茎部表达最为丰富,在莲座叶中表达丰度最低,且在不同组织中均有可变剪接事件。Real-time PCR结果显示,该基因表达受多种逆境影响,尤其受到ABA的明显诱导。EsABCG25具有ABCG家族的典型序列特征;该基因在盐芥不同组织中的表达丰度存在差异,表达受到多种逆境的诱导,与盐芥的抗逆性关系密切。

QUARTET突变四倍体拟南芥的获得与表型分析

何硕康, 罗泽伟

2018, 34(7): 119-125. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0238

摘要 ( 225 )

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为了将四分子分析应用于多倍体遗传重组的研究,本研究从qrt1基因突变的二倍体Columbia（Col）与Landsberg erecta（Ler）生态型拟南芥出发,利用秋水仙素诱导核基因组加倍,利用流式细胞技术及荧光原位杂交技术筛选出成功加倍的qrt1基因突变的四倍体Col与Ler生态型拟南芥。并对其进行营养及生殖相关表型分析。首先qrt1突变抑制了侧根数量、基部侧枝数量以及莲座叶片面积。其次,四倍体莲座叶片面积、花粉、花药以及种子更大,侧根及茎基部分枝减少,抽薹时间推迟,每株果荚数与每果荚种子数更少,但种子发芽率都接近100%。倍性还对某些表型的影响具有背景依赖性,如对主茎分支数量、最终株高以及果荚长度的影响在Col与Ler生态型中表现不同。

基于比较基因组学方法揭示十字花科古老杂交事件

樊晓猛, 戚继

2018, 34(7): 126-137. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0338

摘要 ( 301 )

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杂交是物种进化动力的源泉之一,它有助于快速积累遗传变异,增强群体的遗传多样性,促进新物种的产生,因此在不同物种类群中识别古老和近期的杂交现象具有重要意义。杂交事件的识别方法可以采用多种特征,包括传统的遗传表型、代谢产物、染色体数目,以及群体遗传学和系统发育基因组学提供的基因水平的分子表型。本研究通过选取28个十字花科物种及两个外类群物种作为研究材料,采用比较基因组学和系统发育基因组学研究手段,在叶绿体和核基因两个方向上联合分子表型信息鉴定十字花科内的杂交事件。结果表明：1、以单基因树映射物种树的结果为依据,十字花科物种主要分为两类：其一,姐妹类群分布相对集中、以拟南芥（Arabidopsis thaliana）为代表;其二,姐妹类群分布相对分散暗示基因存在多种来源,以诚实花（Lunaria annua）为代表。2、进一步通过叶绿体和核基因的系统发育关系对比法分析,我们认为诚实花可能是一个新的杂交物种,其39.1%的基因与父本来源的C类群基因关系最近;38.5%的基因与C类群以外类群的基因最近,特别是来自B、C结合类群共同祖先的10号节点（占比3%）支持其作为诚实花的母本来源。3、通过对父母关键进化节点的功能富集分析,发现父本主要富集在生物降解、次级代谢产物、RNA调控等途径上,表明其可能通过RNA调控生物降解、次级代谢过程以适应胁迫环境;母本主要富集在代谢途径上,尤其是碳水化合物、核酸代谢等方面,表明其可能通过增强自身代谢获取相对竞争优势。

棉花SSR标记种质资源纯度鉴定及遗传多样性分析

石建斌, 周红, 王宁, 许庆华, 乔文青, 严根土

2018, 34(7): 138-146. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-1070

摘要 ( 236 )

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采用前期筛选出的26对SSR核心引物,对收集保存的58份棉花种质资源进行纯度检测和遗传多样性分析。结果显示,供试材料的纯度概率介于20%-90%,分子标记检测结果与田间表型相吻合,说明SSR纯度检测的准确度较高,可以作为进行快速检测棉花种质资源纯度的方法。共扩增出85种多态性基因型,每个标记检测到的基因型数在2-5,平均为3.27个,引物多态性信息量（PIC）介于0.073 7-0.928 1,平均为0.363 9。并利用NTsys-pc 2.10软件进行聚类分析,结果表明,58份种质资源的遗传相似系数（GS）变化范围为0.305 1-0.898 3,变幅为0.593 2,在GS=0.63水平上,将供试材料分为5大类,且这些资源材料的DNA聚类与其地理生态来源无关,而与材料的亲缘关系相关性较高,其聚类结果能更真实地反映种质资源间的遗传差异。

番茄附生和内生细菌分离与群落相似性分析

王玲玲, 尚庆茂, 董春娟

2018, 34(7): 147-153. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0118

摘要 ( 220 )

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为了溯清番茄生境以及各组织细菌群落间的相关性,以中杂302为试材,采用传统平板培养法结合16S rRNA拷贝数分析、变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析,对番茄根区、根际土壤以及根、茎、叶片、果实、种子等组织附生和内生细菌的数量和群落相似性进行分析。结果表明,番茄根际的细菌数量最多,根区土壤次之;番茄组织附生细菌的数量显著低于根区和根际土壤中的细菌数量;组织附生细菌中,以根部最多,茎和叶片次之;组织内生细菌的数量较附生细菌少2-4个数量级,并以根内生细菌数量最多,种子表面胶状物中数量最少。DGGE细菌群落相似度分析表明,根际与组织内生样品间的相似度显著高于根区土壤,各组织内生细菌相互间的相似度最高,尤其是根、茎和叶片,以及种子、胎座、胶状物等相邻组织内生细菌间的相似度达到0.6以上。番茄组织尤其是相邻组织间的内生细菌群落结构相似,并与根际细菌密切相关。

棉铃虫类肌钙蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

尼加提·迪里木拉提, 赵洁, 艾新宇, 刘小宁

2018, 34(7): 154-159. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-1115

摘要 ( 216 )

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利用蛋白免疫法制备鼠抗棉铃虫类肌钙蛋白（Helicoverpa armigera Calponin,HaCal）的多克隆抗体并进行初步应用。通过原核表达棉铃虫类肌钙蛋白,镍柱纯化获得目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠,4次免疫后用ELISA检测法确定鼠抗HaCal蛋白多克隆抗体的效价。通过Western blot和免疫组化检测该多克隆抗体免疫特异性。蛋白免疫法制备的鼠抗HaCal多克隆抗体滴度高于1∶819 200。Western-blot和免疫组化显示该抗体能特异性识别棉铃虫体内的天然HaCal蛋白。利用蛋白免疫法制备获得了效价高且特异性强的鼠抗棉铃虫HaCal多克隆抗体,旨为进一步研究棉铃虫HaCal蛋白表达特性及其抗药性功能提供重要的实验工具。

辛硫磷、灭多威和dsRNA饲喂对棉铃虫ace基因表达的影响

张亭, 杨璇璇, 雷勤, 刘娟娟, 李继刚

2018, 34(7): 160-165. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0004

摘要 ( 263 )

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乙酰胆碱酯酶（AChE）是有机磷与氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标,以棉铃虫体内乙酰胆碱酯酶为对象,通过检测辛硫磷、灭多威两类农药处理和饲喂ace dsRNA表达菌对乙酰胆碱酯酶基因（ace1、ace2）转录活性的影响,为阐明棉铃虫化学防治及基于RNAi的防治提供一定的参考。实验采用实时荧光定量PCR方法,分析辛硫磷、灭多威对棉铃虫4龄幼虫诱导12 h、24 h、36 h、48 h、60 h后ace基因的转录水平,利用表达dsRNA的菌液喂食2龄棉铃虫进行RNAi后检测ace基因的沉默效果。结果显示：灭多威和辛硫磷处理后,在12 h时,ace1和ace2皆显著下调,其后,ace1表达下调而ace2上调;RNAi处理后,棉铃虫ace1、ace2基因表达量在24 h、48 h下调明显,随后表达量略有上调。推测农药处理使棉铃虫幼虫生理代谢破坏造成ace1、ace2表达降低,随后ace1基因表达持续下降,而ace2表达逐渐升高,这可能与补偿农药对AchE酶活性的抑制有关;RNAi处理使棉铃虫生长发育受到不同程度的抑制,ace1和ace2基因都出现明显的表达抑制。以上结果为以乙酰胆碱酯酶及其编码基因为靶标的棉铃虫防治提供了参考。

大丽轮枝菌原生质体的制备及再生

赵小强, 陈志荣, 何芳, 沈楠, 高峰, 黄家风

2018, 34(7): 166-173. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0160

摘要 ( 231 )

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为建立大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）原生质体的制备和再生体系,采用单因素分析法分析了大丽轮枝菌摇培时间、裂解酶浓度、酶解时间和温度、渗透压稳定剂的种类和浓度及pH对原生质体释放的影响;从再生培养基、培养基Agar浓度和酶解时间对原生质体的再生条件进行了优化;并对优化条件下获得的原生质体进行了GFP瞬时表达。结果表明,将分生孢子培养18 h收集菌丝体,以1.2 mol/L的KCl作为渗透压稳定剂,在pH 6.0的条件下,加入10 mg/mL的裂解酶,30℃酶解4 h时,获得的原生质体产量最高,达到3.3×10⁷个/mL;在Agar浓度为0.5%的TB3再生培养基中进行原生质体再生,再生率最高,可达22.45%;GFP瞬时表达结果表明,优化条件下获得的原生质体可用于遗传转化材料。

共表达分子伴侣PDI和Ero1对葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中表达的影响

高庆华, 董聪, 王玥, 胡美荣, 王庆庆, 王云鹏, 罗同阳, 刘蕾

2018, 34(7): 174-179. doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-1095

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通过单独表达蛋白质分子伴侣二硫键异构酶（PDI）和共表达PDI和内质网氧化还原酶（Ero1）,提高重组葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的蛋白质分子伴侣表达载体pPICZ/PDI和pPICZ/Ero1-PDI线性化后,电击转化重组毕赤酵母X33/pMD-GOD 细胞,用含有250 μg/mL G418和50 μg/mL Zeocin的YPD双抗平板筛选阳性转化子,阳性转化子进行试管发酵和10 L发酵培养后,分析共表达PDI和Ero1-PDI 对GOD 表达水平的影响。结果显示,共表达PDI及Ero1-PDI 分别使葡萄糖氧化酶在10 L发酵罐中30℃培养,酶活分别达到476 U/mL 和736 U/mL,相比原始菌株在相同条件下分别提高了29.7%和100%。整合分子伴侣PDI和Ero1促进蛋白正确折叠明显地提高葡萄糖氧化酶蛋白表达。

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2018, 34(7): 200.

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2018, 34(7): 250.

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2018, 34(7): 300.

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