单细胞测序技术在微生物生态领域中的应用
Applications of Single-cell Sequencing Technology in Microbial Ecology
A：简并寡核苷酸引物PCR技术（DOP-PCR）。随机引物的3' 端含6bp的随机序列,可以随机和基因组DNA结合,实现对全基因组的扩增;B：多重置换扩增技术（MDA）。随机六聚体引物与模板DNA结合,并在φ29 DNA聚合酶的作用下延伸;随后引物与延伸链结合,以多分支结构的形式延伸扩增;C：多次退火环状循环扩增技术（MALBAC）。首先引物与模板DNA结合,在具有置换活性的DNA聚合酶作用下延伸产生半扩增产物;随后随机引物与半扩增产物结合并延伸形成完整产物;最后对尾部互补成环的完整产物进行扩增;D：Tn5转座酶技术。Tn5转座酶随机将样品DNA片段化,并在小片段DNA两端加上特定的接头,便于后续的扩增和测序;E：细胞内融合基因技术（epicPCR）。两段目标基因被封装在同一微球中,在3条特殊引物的作用下产生融合片段;随后通过巢式PCR消除半扩增产物的影响,特异性扩增融合片段,并缩短其长度供二代测序
