摘要： <正> PCR技术的诞生使得研究者不仅可以将微量的核酸扩增至可检测水平,甚至还可以用来克隆和序列分析。PCR正在如下领域中得到应用:法医学;新基因表达的鉴别;基因图谱和测序等。从表面上看,PCR似乎不适用于作基因的精确定量。PCR的动力学是目标序列的指数扩增;因此在30个循环之后,初始目标序列理论上已扩增了2~(30)倍。但事实上,随着产物的积累,PCR便进入了扩增速率减慢的平台期。进入平台期的原因有:在多次高温循环中酶的失活;聚合酶3′外切酶活性导致的引物降解;产物自身的复性等。因此,一个检测低拷贝数分子的优化PCR往往需要30～40次循环扩增,它的产物才会在标准的溴化乙锭染色胶上可见。然而,如果初始序列的拷贝数较上例高2～3个数量级,则扩增的平台期就会在较少的循环倍数后出现。这样,即使初始序列拷贝数有较大差异,PCR产物的数量都趋于接近。用PCR定量时,值得关注的其它问题有初始目标序列量的准确判断,以及许多温度循环器中不同孔间出现的扩增差异。
