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人GLP-1R基因转染BHK细胞及重组细胞的应用

朱振洪;王同映;黄岩山;   

  1. 浙江中医药大学生物工程学院,杭州九源基因工程有限公司,杭州九源基因工程有限公司 杭州310053,杭州310018,杭州310018
  • 出版日期:2007-06-26 发布日期:2007-06-26

  • Published:2007-06-26 Online:2007-06-26

摘要: 为了构建表达人胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因的BHK细胞株,并利用该重组细胞对GLP-1等相关肽进行活性测定,首先通过酶切、连接方式将人GLP-1R基因克隆至真核表达载体pCDNA3.(1+)中,然后用脂质体转染法将重组质粒转染至BHK-21细胞,转染后的细胞经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株。经过该细胞株RT-PCR验证,结果证实目的基因已整合至BHK-21细胞基因组中,并获得成功转录和表达。活性检测实验表明该重组细胞株经过GLP-1的刺激后,其细胞中的cAMP含量得到明显提升。该细胞株的构建为GLP-1及相关肽的活性测定奠定了基础。

关键词: GLP-1受体, BHK-21, cAMP