人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化

人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化

吴芳明;韩春光;彭明丽;黄琳仪;王琼;朱欣凯;刘永学;

军事医学科学院放射与辐射医学研究所;江西中医学院中药系;

出版日期:2008-06-26 发布日期:2008-06-26
基金资助:
国家自然科学基金(NO.30171096);; “十五”全军医药卫生基金(No.01MB056)资助项目

Published:2008-06-26 Online:2008-06-26

摘要/Abstract

摘要： 旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1α,再以重组质粒为模板,运用重叠延伸PCR法扩增得到融合基因GPR81-Gi1α,测序无误后将融合基因与pFASTBac1重组得重组质粒pFASTBac1-GPR81-Gi1α,而后转化DH10Bac,使该融合基因重组质粒发生特异性的转座和病毒重组,获得杆状病毒表达穿梭质粒pBacmid-GPR81- Ci1α,再将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,获得含杆状病毒的细胞分泌上清,以上清在不同条件下(包括不同感染时间、滴度等)感染sf9细胞以优化融合蛋白在昆虫sf9细胞的表达条件。结果表明,感染72h且感染强度moi为5时是融合蛋白在sf9细胞中高效表达的理想条件。该表达体系的建立及蛋白表达条件的优化,保证了足量GPR81- Gi1α融合蛋白的制备。

关键词: GPR81, Gi1α, 融合蛋白, bac-to-bac杆状病毒表达

吴芳明;韩春光;彭明丽;黄琳仪;王琼;朱欣凯;刘永学;. 人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化[J]. .

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