IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

黄思超;杜军;邱胜红;徐俊;傅刘鹏;马锦珊;蔡绍晖;

暨南大学药学院;中山大学药学院;

出版日期:2009-11-26 发布日期:2009-11-26
基金资助:
国家自然科学基金(30672510);; 广东省科技计划重点资助项目(7112208000694)

Published:2009-11-26 Online:2009-11-26

摘要/Abstract

摘要： 旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显着的抑制活性(P<0.01)。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具。

关键词: IκBα, 缺失突变体, 载体构建, NF-κB

黄思超;杜军;邱胜红;徐俊;傅刘鹏;马锦珊;蔡绍晖;. IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测[J]. .

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