大苞萱草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

大苞萱草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

沈鹏;董丽;

北京林业大学园林学院;

出版日期:2010-08-26 发布日期:2010-08-26
基金资助:
国家林业局“948”项目[2002-08(2)]

Published:2010-08-26 Online:2010-08-26

摘要/Abstract

摘要： 分别采用正交设计和单因子试验两种方法对影响大苞萱草ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。两种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了大苞萱草ISSR-PCR的最佳反应体系。在20μL的反应体系中:Taq酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP0.20 mmol/L,引物0.4μmol/L,1×PCR buffer,30 ng模板DNA。在此基础上筛选出10个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。

关键词: 大苞萱草, ISSR-PCR, 正交设计, 单因子试验

沈鹏;董丽;. 大苞萱草ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. .

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