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GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

张怡;周庆峰;贾孟;张红绪;李成伟;   

  1. 周口师范学院生命科学系植物遗传与分子育种重点实验室;商丘师范学院生命科学系;河南师范大学生命科学学院;
  • 出版日期:2011-06-26 发布日期:2011-06-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(30901877);;河南省科技厅社会发展项目(092102310209);; 河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B180021)

  • Published:2011-06-26 Online:2011-06-26

摘要: 为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。

关键词: Exendin-4, 融合蛋白, 可溶表达, 亲和纯化