重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

张念章;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;逯忠新;

中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室;

出版日期:2011-07-26 发布日期:2011-07-26
基金资助:
国家重点基础研究发展计划(“973”)项目(2006CB504403);;“十一五”科技支撑计划项目(2006BAD06A01,2006BAD06A12);; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室基金项目(SKLVEB2008ZZKT009);; 广东省兽医公共卫生公共实验室开放基金项目(GSKJ090202)

Published:2011-07-26 Online:2011-07-26

摘要/Abstract

摘要： 利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coliSM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。

张念章;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;逯忠新;. 重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因[J]. .

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重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

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