葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

赖呈纯;范丽华;谢鸿根;余亚白;郑铭西;谢福鑫;

福建省农业科学院农业工程技术研究所;

出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
基金资助:
福建省农业科学院博士科研启动基金项目(闽农科政[2010]245号),福建省农业科学院院管项目(A2010-1)

Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要/Abstract

摘要： 采用正交设计L9(34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平。最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng。反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存。

关键词: 葡萄ISSR-PCR, 正交设计, 单因素试验, 反应体系

赖呈纯;范丽华;谢鸿根;余亚白;郑铭西;谢福鑫;. 葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. .

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