正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (8): 65-69.

正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系

冯丹^1,2, 宁德鲁¹, 陈少瑜^1,2, 李勇杰¹, 张艳丽¹, 吴涛^1,2, 陈海云¹

1.云南省林业科学院, 昆明 650201;
2.云南省森林植物培育与开发利用重点试验室国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点试验室, 昆明 650201

修回日期:2013-11-15 出版日期:2014-08-15 发布日期:2014-08-01
作者简介:作者简介: 冯丹，女，硕士，研究实习员，研究方向：林木遗传育种；E-mail：fengdan1220@hotmail.com

Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Anise（Illicium verum Hook. f.）Based on Orthogonal Design

Feng Dan^1,2, Ning Delu¹, Chen Shaoyu^1,2, Li Yongjie¹, Zhang Yanli¹, Wu Tao^1,2, Chen Haiyun¹

1. Yunnan Academy of Forestry, Kunming 650201;
2. Yunnan Provincial Key Laboratory of Cultivation and Exploitation of Forest Plants, Yunnan Laboratory for Conservation of Rare, Endangered & Endemic Forest Plants, Public Key Laboratory of the State Forestry Administration, Kunming 650201

Revised:2013-11-15 Published:2014-08-15 Online:2014-08-01
Supported by:
云南省“十一五”科技攻关项目(2006NG26);云南省自然科学基金项目(2010ZC234)

摘要/Abstract

摘要：

利用正交试验设计研究Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物（UBC 886）、dNTP、Mg²⁺浓度5个因素对云南八角ISSR-PCR反应的影响，建立其最佳反应体系。结果表明：25 μL的反应体系中5个因子的最佳水平为：Mg²⁺ 3 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板0.016 ng、引物0.8 μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L。PCR最佳反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，46℃退火45 s，72℃延伸1 min，40次循环；72℃最后延伸7 min，4℃保存。

关键词: 八角, ISSR-PCR反应, 正交设计, 体系优化

Abstract:

Based on orthogonal design experiments, five main factors in ISSR-PCR amplification system, including Mg²⁺ concentration, Taq DNA polymerase, DNA template, primer（UBC 868）and dNTPs, were studied to optimize the system for Illicium verum Hook. f.. The results showed that the optimized system was a total volume of 25 μL containing 3 mmol/L Mg²⁺, 0.5 U Taq DNA polymerase, 0.016 ng DNA template, 0.8 μmol/L primer and 0.2 mmol/L dNTPs. The optimal amplified procedure was started with predegeneration at 94℃ for 5 minutes, followed by 40 cycles of 30 seconds for denaturalization at 94℃, 45 seconds of annealing at 46℃, 60 seconds of extension at 72℃；7 minutes of extension at 72℃ and indefinitely remain at 4℃.

Key words: Illicium verum Hook. f., ISSR-PCR, Orthogonal design, Reaction system

冯丹, 宁德鲁, 陈少瑜, 李勇杰, 张艳丽, 吴涛, 陈海云. 正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系[J]. 生物技术通报, 2014, 0(8): 65-69.

Feng Dan, Ning Delu, Chen Shaoyu, Li Yongjie, Zhang Yanli, Wu Tao, Chen Haiyun. Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Anise（Illicium verum Hook. f.）Based on Orthogonal Design[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(8): 65-69.

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