生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (10): 148-152.
张树军1,2,, 赵臣3, 狄建军1,2,, 穆莎茉莉1,2,, 仙玲玲4, 于娜4, 黄瑾4
Zhang Shujun1,2,, Zhao Chen3, Di Jianjun1,2,, Mushamoli1,2,, Xian Lingling4, Yu Na4, Huang Jin4,
摘要:
旨在构建Neuritin 的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin 蛋白,研究其神经生物学功能。PCR 扩增编码neuritin 基因cDNA 序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K 中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k 重组质粒经PCR 与测序鉴定后,使用Sal Ⅰ 酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115, 经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin 的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE 和Western blot 分析得到11 kD 的Neuritin 蛋白,纯化的Neuritin 蛋白加入PC12 细胞培养液中,能促进其突起的生长。