生物技术通报

秦巧,张海文,黄荣峰

2013, 0(10): 1-5.

摘要 ( 326 )

PDF (1179KB) ( 1663 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

表观遗传学是研究在基因的DNA 序列没有改变的情况下，但功能发生了可遗传性变化的遗传学分支学科。JMJC 蛋白是表观遗传学调控中的一类关键酶，其功能是催化组蛋白赖氨酸的去甲基化，通过染色质重塑或基因组印迹等途径调控基因的表达，影响植物的生长发育。综述拟南芥和水稻JMJC 蛋白家族的近期研究进展，以期探讨JMJC 组蛋白去甲基化酶对拟南芥和水稻生长发育的影响及其调控的分子基础。

植物体内活性氧的研究及其在植物抗逆方面的应用

薛鑫,张芊,吴金霞,

2013, 0(10): 6-11.

摘要 ( 930 )

PDF (1177KB) ( 4339 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是植物有氧代谢的副产物，同时环境胁迫也会使植物细胞中积累大量的活性氧。低浓度的活性氧可以作为信号分子存在，诱导防御基因的表达和植物对环境的适应反应。当逆境胁迫迫使植物细胞中产生大量活性氧时，就会导致细胞内的大分子物质及其他组分受损，阻碍植物的正常代谢和生长，甚至死亡。植物体内存在活性氧清除机制，可以在一定范围内维持活性氧的平衡。研究表明，利用植物体内自身的活性氧清除机制可以提高植物的抗逆性。对当前植物活性氧的研究动态进行概述，同时对植物活性氧清除机制在提高植物抗逆性方面的应用进行探讨。

植物6-磷酸海藻糖参与的调控途径

白桦,王佩云,田晓伟,姚新灵

2013, 0(10): 12-17.

摘要 ( 335 )

PDF (1184KB) ( 1782 )

相关文章 | 计量指标

糖不仅是植物的代谢成分，而且作为信号分子调控植物代谢，适应多样的环境，其中，6-磷酸海藻糖（T6P）是被研究较多的信号分子。以近年来T6P 相关的分子生物学研究进展为基础，讨论T6P 作为信号分子参与的植物胁迫响应、昼夜周期调控和植物内源激素调控途径；从分子遗传学视角对T6P 在这些响应和调控途径中的功能、信号作用方式、分子机理、尚需回答的问题及研究方法进行综述评价。

我国牧草种质资源重要性状分子标记研究进展

徐春波,王勇,赵来喜,赵海霞

2013, 0(10): 18-23.

摘要 ( 280 )

PDF (1194KB) ( 561 )

相关文章 | 计量指标

分子标记技术发展迅猛，正日益成为牧草种质资源的辅助研究手段，其研究技术也日趋成熟。概述分子标记应用在产量、品质、抗逆性和抗病虫等牧草重要性状上的研究进展，分析牧草种质资源重要性状分子标记中存在的问题，并对其应用前景进行展望，以期为今后我国在牧草种质资源方面进一步开展相关研究提供参考。

钙网蛋白通过内质网应激介导细胞凋亡的分子机制

吴薇,刘朝奇

2013, 0(10): 24-27.

摘要 ( 333 )

PDF (1207KB) ( 2617 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是46 kD 大小的内质网管腔蛋白，具有分子伴侣活性、调节内钙稳态以及细胞凋亡等多种生物学功能。内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）是内质网生理功能发生紊乱的一种亚细胞器病理过程，早期反应是可逆的，但随着细胞损伤加重将会导致细胞的凋亡，即为内质网应激启动的细胞凋亡。新的研究显示，CRT 在该凋亡途径中扮演着重要角色。从三方面综述两者间的相互关系，以期为该方向的研究人员提供一些参考。

SUMO在蛋白表达中的应用

汪小杰,毛若雨,张勇,滕达,王秀敏,王建华

2013, 0(10): 28-33.

摘要 ( 414 )

PDF (1343KB) ( 2313 )

相关文章 | 计量指标

毒性蛋白表达具有很大的技术挑战性，其不仅对宿主菌有毒性，而且易于被宿主内源性蛋白酶降解。融合表达是实现毒性蛋白表达的有效策略。目前常用的融合标签有硫氧还蛋白、绿色荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、类固醇异构酶、N 利用基质A 及谷胱甘肽-S-转移酶等。而SUMO 标签除具有传统融合标签的特性外，还具有分子小、促进折叠以及能被SUMO 蛋白酶1 专一性识别等优势，因此广受关注。综述SUMO 标签、SUMO 蛋白酶切割特性及其表达系统在异源蛋白融合表达中的应用。

抗增殖蛋白与氧化应激

李铁松,高杨,王颖,李庆伟

2013, 0(10): 34-39.

摘要 ( 340 )

PDF (1466KB) ( 1219 )

相关文章 | 计量指标

抗增殖蛋白为一种高度保守、分布广泛、功能多样的蛋白，由核基因编码，定位于线粒体内膜、细胞核、细胞膜和基质中，由于其参与多种生物学进程，已引起广泛关注。由于其在线粒体上的特殊定位、结构和功能，使其近年在与氧化应激功能相关的研究中开始逐渐成为新的热点。针对抗增殖蛋白与线粒体的研究，系统阐述其在氧化应激及相关疾病和老龄化过程中的重要作用，并对其应用前景作以展望。

金黄色葡萄球菌SarA家族蛋白及其翻译后修饰

吴睿睿,朱福兴

2013, 0(10): 40-45.

摘要 ( 351 )

PDF (2536KB) ( 1078 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

在金黄色葡萄球菌全基因组中发现了一类SarA 类似的蛋白家族，是金黄色葡萄球菌生理和毒力主要的调控因子。MgA 、SarA 和SarZ 等蛋白分子中半胱氨酸的磷酸化修饰或氧化还原修饰引起了蛋白质构象的变化，从而调节了金黄色葡萄球菌毒力因子的产生以及细菌对万古霉素的抗性。SarA 家族蛋白具有同源性，蛋白翻译后修饰具有相似性，同时蛋白之间又相互作用。

检测重金属离子生物传感器的研究进展

王明华, 赵二劳, 李杜娟

2013, 0(10): 46-51.

摘要 ( 315 )

PDF (2587KB) ( 2107 )

相关文章 | 计量指标

重金属污染广泛存在于环境中，它能通过生物富集作用对动植物及人类产生危害。利用分析化学方法检测重金属离子对其生物危害缺乏直接检定，生物传感器检测重金属离子吸引了越来越多的研究兴趣。对检测重金属离子的各种生物传感器进行介绍，并分析各种生物传感器的特点，指出依靠先进的生物技术研究方法和成果、了解生物传感器生物敏感材料的结构和功能，进一步开发能够自动操作的便携生物传感器是能够满足重金属污染检测要求的方法。

血浆/血清MicroRNAs定量分析的校正策略

王雁,汤纳平,邱云良,南雅萍,马璟

2013, 0(10): 52-57.

摘要 ( 299 )

PDF (1458KB) ( 1455 )

相关文章 | 计量指标

血液循环microRNAs 表达量的变化与各种疾病及组织损伤的相关性研究备受关注。但细胞的污染，RNA 提取和处理过程中的试验误差都会不同程度的影响microRNAs 定量分析的结果。各种校正策略的使用可以消除这些影响因素。就目前使用的不同校正策略的优缺点进行分析，便于研究者正确选择血液循环microRNAs 定量分析的校正方法，从而获得准确可靠的生物学意义上的变化。

BAC-FISH在植物基因组研究中的应用

甘仪梅,曾凡云,张树珍,杨本鹏

2013, 0(10): 58-65.

摘要 ( 307 )

PDF (1283KB) ( 1584 )

相关文章 | 计量指标

细菌人工染色体荧光原位杂交（BAC-FISH）是将包含不同特性的BAC 克隆直接定位到染色体上的技术，其在植物基因组学和分子细胞遗传学研究中具有不可替代的作用。综述其在各种植物染色体鉴定和核型分析、图谱构建、植物起源与进化分析、基因定位以及FISH 的分辨率等植物基因组学研究的应用进展。

醛基片PCR芯片技术在转基因玉米品系检测中的应用研究

张明哲,张晓峰,陈曦,吴姗,陈笑梅,周圆

2013, 0(10): 66-70.

摘要 ( 293 )

PDF (1647KB) ( 913 )

相关文章 | 计量指标

针对9 种转基因玉米品系Bt11 、TC1507 、Bt176 、MON810 、MON863 、GA21 、NK603 、Mon88017 、MIR604 进行醛基片PCR 芯片高通量检测和条件优化。特异性和灵敏度试验表明，醛基片PCR 芯片的特异性较好，能应用于转基因玉米品系鉴定。而该方法应用于转基因检测的灵敏度为5%，有待于后续试验进一步优化。

利用农杆菌侵染新技术在豌豆中瞬时表达ha FGF

杨丽萍,金太成,周晓馥

2013, 0(10): 71-75.

摘要 ( 312 )

PDF (2575KB) ( 1458 )

相关文章 | 计量指标

采用一种操作简单的侵染方法，通过豌豆种子吸收携带病毒载体PEBV 的农杆菌菌液进行ha FGF 蛋白的表达，并采用半定量RT-PCR 、Western blotting 和考马斯亮蓝法对蛋白表达的结果进行定量分析。结果表明，利用来源于PEBV 的病毒载体在豌豆（Pisum sativum L.）中成功表达了GFP 和ha FGF 蛋白，对菌液浓度等条件的优化显著提高了GFP 的表达效率，植物中药用蛋白ha FGF 的表达水平占总可溶性蛋白的2.6% 。该瞬时表达体系具有独特优势，如简便、高效、表达稳定，在生产药用蛋白方面具有广阔的应用前景。

全雌系苦瓜ACC氧化酶基因cDNA克隆及序列分析

王日升,张曼,黄如葵,刘文君,董文斌,车江旅,方锋学,李杨瑞

2013, 0(10): 76-80.

摘要 ( 312 )

PDF (2270KB) ( 980 )

相关文章 | 计量指标

为研究1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶（ACC 氧化酶，ACO）基因在苦瓜性别分化中的作用，以全雌系苦瓜‘X-Hei-d-d’ 花蕾为试材，采用RT-PCR 和RACE 技术获得了ACC 氧化酶基因（Mc-ACO1）的全长cDNA 序列。该序列为1 137 bp（GenBank 登录号：FJ459813），其完整开放阅读框长1 005 bp，编码334 个氨基酸，预测分子量为37.30 kD，肽链N 端缺失ACOs 家族典型的1 个保守区和2 个保守二价铁离子/ 抗坏血酸依赖型双加氧酶氨基酸残基。序列分析表明，植物ACO 基因的演化与其来源植物亲缘关系的一致性较高；与其他物种相比，苦瓜Mc-ACO1 不同的氨基酸序列主要表现在肽链N 端；苦瓜Mc-ACO1 应属于黄瓜Cs-ACO2 类成员，功能可能与性别分化相关。

普通菜豆抗锈病基因SCAR 标记鉴定

吴星波,岳欢,郝俊杰,张晓艳,李红卫,王珍青,吕享华

2013, 0(10): 81-86.

摘要 ( 319 )

PDF (1883KB) ( 982 )

相关文章 | 计量指标

利用10 个普通菜豆抗锈病基因SCAR 标记（SK14 、SA14 、SI19 、SBC6 、SAD12 、SAE19 、UR11-GT2 、KB126 、SF10 和SBA8）引物组，对78 份生产和研究中常用的普通菜豆资源进行了抗锈病分子标记鉴定。在这78 份资源中，SA14 和KB126 标记引物扩增无特异性，SI19 和SAD12 无扩增带。其中，8 份资源含有SK14 标记，23 份资源含有SBC6 标记，28 份资源含有SAE19 标记，5 份资源含有UR11-GT2 标记，62 份资源含有SF10 标记，76 份资源含有SBA8 标记。含有2-5 个标记的资源共67 份。明确了78 份参试菜豆资源所含的抗锈病基因类型，表明含有多个抗锈病基因的菜豆资源较为常见。

改良Trizol法提取高质量蒙古沙冬青总RNA

陈静,高飞,周宜君,张孜宸,李章磊,曹玉震,张至玮

2013, 0(10): 87-92.

摘要 ( 313 )

PDF (2509KB) ( 1160 )

相关文章 | 计量指标

以木本植物蒙古沙冬青的叶片和根为材料，采用改良Trizol 法提取总RNA 。结果表明，与传统Trizol 法相比，改良Trizol 法能有效去除提取过程中残留的异硫氰酸胍、β-巯基乙醇以及植物本身的糖、酚类物质，获得高质量总RNA 。改良Trizol 法提取总RNA 技术已被成功应用于蒙古沙冬青转录组数据库的建立。该方法可为木本植物提取高质量RNA 提供借鉴。

滑桃树种子提取物对其内生菌活性化合物的影响

吴欣

2013, 0(10): 93-97.

摘要 ( 321 )

PDF (1871KB) ( 812 )

相关文章 | 计量指标

Streptomyces sp. WXC 菌株是从滑桃树（Trewia nudiflora）种子中分离到的一株内生菌，滑桃树种子提取物对Streptomyces sp. WXC 菌株的生长和活性化合物的表达有促进作用。运用HPLC 、RT-PCR 和Real-time PCR 技术，研究Streptomyces sp. WXC 菌株在加入滑桃树种子提取物和不加入滑桃树种子提取物的两种条件下，其活性化合物富伦菌素B 产量及其生物合成基因表达量的差异。结果显示，滑桃树种子提取物诱导了活性化合物富伦菌素B 生物合成基因的表达，从而提高了富伦菌素B 的产量。首次揭示了植物与其内生放线菌之间的化学作用。

乙醇提取红豆杉树叶紫杉醇醇提条件的研究

余响华,戴永强,邵金华

2013, 0(10): 98-102.

摘要 ( 302 )

PDF (2018KB) ( 1061 )

相关文章 | 计量指标

对南方红豆杉树叶中紫杉醇的最佳醇提工艺条件进行了研究。采用乙醇浸提方法，考查了粉碎度、乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间对紫杉醇提取效率的影响，经过一系列的单因素试验和正交试验，得到了紫杉醇醇提工艺的最佳条件：在粉碎度120 目、95% 乙醇浸提、料液比为1∶15 、提取温度40℃ 、提取4 h 、重复2 次的条件下，经乙酸乙酯—丙酮（6∶4）洗脱纯化， HPLC 测定紫杉醇含量，可使紫杉醇含量达到0.012 5 mg/g 。

7号染色体46765080位点SNP与绵羊尾臀性状相关性研究

梁耀伟,张伟,沈敏,李欢,高磊,杨井泉,刘守仁,甘尚权,王新华

2013, 0(10): 103-108.

摘要 ( 284 )

PDF (3207KB) ( 729 )

相关文章 | 计量指标

绵羊尾（臀）脂性状是重要耐逆性状，其脂肪沉积的分子机制不清。旨在研究绵羊脂尾（臀）沉积脂肪的分子遗传机制，以最近文献报道的7 号染色体一处SNP 位点为候选分子标记，利用PCR-RFLP 方法检测该位点在尾型极端差异的阿勒泰羊、哈萨克羊、湖羊、中国美利奴细毛羊以及萨福克羊群体中的多态性，并采用模型分析其与尾（臀）脂性状的相关性。结果表明， 7 号染色体46765080 位点的G 等位基因高频出现在表型分值较高的臀脂型阿勒泰羊群体中，A 等位基因在长瘦尾绵羊品种中高频出现；等位基因频率G/A 的比值与尾臀表型分值相关性模型表明G/A 比值随着尾臀表型分值增加呈指数增长。以上结果表明，绵羊7 号染色体46765080 位点在尾（臀）脂与瘦尾绵羊群体中分布存在显著性差异，该SNP 位点可作为一个理想的分子标记应用于高、低脂绵羊品种选育。

小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析

张远,杨旬旬,吴风瑞,刘勇,丁彪,王彩红,黄继昌,李文雍

2013, 0(10): 109-112.

摘要 ( 342 )

PDF (1883KB) ( 1234 )

相关文章 | 计量指标

为研究小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端缺失片段活性，以小鼠基因组DNA 为模板，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增4 条不同长度的小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端系列缺失片段，双酶切后克隆入pGL3-Basic 荧光素酶报告基因载体，构建Dnmt1 启动子-pGL3-Basic 重组质粒。随后经脂质体转染入NIH/3T3 细胞并检测各缺失片段荧光素酶活性。结果表明，成功构建Dnmt1 启动子5' 端系列缺失片段-pGL3-Basic 荧光报告基因重组质粒。经双荧光素酶报告基因检测后发现，所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性，且最长缺失片段Dnmt1-1-pGL3-Basic 活性最强，约为其他的3 倍左右。结果初步证明小鼠Dnmt1 启动子在-1 866-+57 bp 区域具有较强转录活性。

不同温度下VC对小鼠卵母细胞排卵后老化的调控作用

李倩,崔龙波,赵振军

2013, 0(10): 113-119.

摘要 ( 289 )

PDF (3150KB) ( 1089 )

相关文章 | 计量指标

为研究抗氧化剂维生素C（Vitamin C，VC）对小鼠卵母细胞排卵后老化的调控作用，找到有效抑制卵母细胞老化的方法，通过孤雌激活和胚胎发育试验系统研究了VC 在不同温度下对小鼠卵母细胞孤雌激活敏感性的抑制以及对胚胎发育能力的维持情况，初步筛选了有效抑制卵母细胞老化的方案；并通过体外受精发育试验和细胞免疫组化试验，分别研究了本筛选方案对卵母细胞受精及受精后胚胎发育的能力，以及对皮质颗粒分布和抗凋亡蛋白——BCL2 蛋白水平的影响。结果显示，卵母细胞在添加200 μmol/L VC 的HCZB 中于15℃ 培养24 h 后，37℃ 恢复培养6 h 是本试验筛选的能有效抑制小鼠卵母细胞排卵后老化的优化方案，说明一定浓度的抗氧化剂VC 联合适当低温可以有效抑制卵母细胞的老化。

斑马鱼转基因平台的建立

刘丽丽,王健,王海胜,余凯敏,李国超,闫艳春

2013, 0(10): 120-126.

摘要 ( 405 )

PDF (2140KB) ( 2216 )

相关文章 | 计量指标

建立实验室斑马鱼转基因平台，旨在为实验室斑马鱼规模化繁殖、转基因斑马鱼研究提供技术流程、生物材料和执行标准。以一对Tübingen 品系斑马鱼为材料，在实验室条件下进行扩大繁殖；将广谱表达绿色荧光蛋白GFP 真核载体pEGFP-N3 通过显微注射的手段转入斑马鱼胚胎，获得转基因斑马鱼；通过荧光显微镜观察斑马鱼GFP 表达情况，并初步筛选转基因个体；以观察到GFP 表达的斑马鱼为材料，利用PCR 验证外源基因pEGFP-N3 在宿主细胞内的整合情况。结果显示，在实验室内建立了完善的斑马鱼养殖系统，可以长期进行斑马鱼饲养、繁殖、育种等研究工作；建立了斑马鱼基础分子生物学试验体系，可以进行斑马鱼分子水平的研究工作；建立了斑马鱼转基因平台，为构建转基因斑马鱼品系、外源基因整合机制等研究奠定基础。

烟草赤星病菌拮抗性放线菌Q14的筛选及鉴定

廉立慧,高丽君,杨娜,王涛,张显忠

2013, 0(10): 127-130.

摘要 ( 293 )

PDF (3174KB) ( 839 )

相关文章 | 计量指标

烟草赤星病对烟草生产威胁极大，旨在通过筛选拮抗菌为烟草赤星病菌的生物防治提供新的选择。采用平板分离培养、对峙平板法、16S rDNA 系统发育分析等方法。结果显示，从茄子根围土壤中分离到36 株放线菌，以烟草赤星病菌为目标菌，采用对峙平板法测定，筛选到6 株有拮抗活性菌株，占所分离总数的16.67% 。其中Q14 对烟草赤星病菌的拮抗作用最强，抑菌带宽为14.5 mm，并且对黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌也有较强的拮抗作用。通过对菌株Q14 的形态观察培养特征生理生化反应和16S rDNA 测定（GenBank 登录号KC675186），将其鉴定为多产色链霉菌。分离获得的一株多产色链霉菌拮对烟草赤星病有较好的拮抗作用，目前国内尚属首次报道，对烟草赤星病生物防治又提供了新的选择。

枯草芽孢杆菌BS24在苹果叶面的定殖及其对叶面菌群的影响

冉淦侨,王楠,戴佳锟,赵文娟,任平,秦涛

2013, 0(10): 131-136.

摘要 ( 297 )

PDF (2019KB) ( 924 )

相关文章 | 计量指标

为了进一步明确枯草芽孢杆菌BS24 对苹果早期落叶病的生防作用，分别对BS24 菌株在苹果叶面上的定殖作用及其对叶面其它微生物种类和数量的影响进行了考察。结果表明，在田间条件下，BS24 菌株能在苹果叶面成功定殖，但随时间的变化呈下降趋势；在无降雨等恶劣天气影响的情况下，喷施菌剂15 d 后，叶面检测到的BS24 菌株的活菌量从最初的2.52×107 CFU/g 成熟叶下降至2.11×105 CFU/g 成熟叶。与未喷施菌剂的叶面微生物菌群对比，喷施菌剂后苹果叶面菌群的数量显著下降；且种类上，喷施菌剂后的苹果叶面细菌种类少了栖稻假单胞菌、洛菲不动杆菌、Bacillus lehensis 和玫瑰库克氏菌；真菌种类少了细交链孢菌、Eupenicillium janthinellum 和大丽轮枝菌。

诱导纤维堆囊菌高产埃博霉素的种间微生物筛选及鉴定

李亚伟,赵林,郝永伟,唐秀丽,杨继坤,高玉振,刘新利

2013, 0(10): 137-141.

摘要 ( 285 )

PDF (3147KB) ( 625 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

微生物之间存在相互作用，引入异己微生物通常可以诱导某微生物的代谢调控。筛选到一株能促进纤维堆囊菌高产埃博霉素的微生物，鉴定为烟曲霉Aspergillus fumigatus M03 。该菌株的有机粗提物可以诱导纤维堆囊菌埃博霉素A 和B 的产量分别提高72.3% 和59.7%，其适量菌体水相粗提物也有相同的诱导作用，使埃博霉素A 和B 的产量分别提高25.6% 和24.7% 。该菌株的菌体水相粗提物高温失活后对埃博霉素合成的诱导作用消失，添加浓度增加时出现抑制作用。该菌株发酵液对埃博霉素的合成没有促进作用，且随着浓度的增加抑制作用增强。

西沙野生诺尼种子内生细菌群落多样性的初步研究

刘洋,李辉,李金霞,曹艳花,姚粟,白飞荣,谭望桥,程池

2013, 0(10): 142-147.

摘要 ( 271 )

PDF (1748KB) ( 1020 )

相关文章 | 计量指标

通过构建16S rDNA 克隆文库的非培养方法对我国西沙野生诺尼种子内生细菌群落结构多样性进行研究，共涉及Proteobacteria 、Firmicutes 、Bacteroidetes 及Actinobacteria 四大类群，包含33 个属，42 个OTU，优势菌属（丰度）依次为Enterob-acter sp.（17.55%）、Bacillus sp.（16.79%）、Acinetobacter sp.（6.11%）、Pseudomonas sp.（6.11%）及Piscinibacter sp.（6.11%）。这是国内外首次利用非培养方法针对诺尼种子内生细菌群落多样性进行研究的报道。

Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响

张树军,赵臣,狄建军,穆莎茉莉,仙玲玲,于娜,黄瑾

2013, 0(10): 148-152.

摘要 ( 290 )

PDF (3621KB) ( 737 )

相关文章 | 计量指标

旨在构建Neuritin 的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin 蛋白，研究其神经生物学功能。PCR 扩增编码neuritin 基因cDNA 序列，并纯化回收，通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K 中，转化大肠杆菌DH5α，neuritin-pPIC9k 重组质粒经PCR 与测序鉴定后，使用Sal Ⅰ 酶切使其线性化，电击转化酵母菌GS115，经筛选与鉴定，成功构建了Neuritin 的毕赤酵母表达系统。结果表明，使用甲醇诱导其表达，SDS-PAGE 和Western blot 分析得到11 kD 的Neuritin 蛋白，纯化的Neuritin 蛋白加入PC12 细胞培养液中，能促进其突起的生长。

地芽孢杆菌Geobacillus sp.GXS1α-淀粉酶的饱和突变及酶学性质研究

薛蓓,裴建新,王治宾,罗章,韦宇拓

2013, 0(10): 153-159.

摘要 ( 311 )

PDF (2852KB) ( 881 )

相关文章 | 计量指标

采用半理性设计方法，在网站Geno3D 上以PDB 数据库中B. stearothermophilus 麦芽糖淀粉酶（BSMA）的三维结构为模板，对AMY（α-淀粉酶）进行三维结构同源建模（二者氨基酸的同源性为33％）。比较同源建模预测的3D 结构和模板BSMA 的3D 结构关键位点，在此基础上通过计算机辅助设计软件ProSa2003，根据能量变化确定了AMY 三个饱和突变位点：D192 、E221 和D289 。利用兼并引物对AMY 的假定活性中心位点D192 、E221 和D289 的氨基酸分别进行饱和突变，定点（饱和）突变库筛选得到4 个有活力的突变子D192A 、E221N 、E221L 和D289L，并对突变酶的酶学性质进行初步研究。

果糖缬氨酸氧化酶在sf9细胞中的表达

徐影,赵雪,于源华

2013, 0(10): 160-164.

摘要 ( 299 )

PDF (3665KB) ( 1048 )

相关文章 | 计量指标

利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞sf9 中表达果糖缬氨酸氧化酶基因（FVO）。人工合成FVO 基因，与载体pFastBac1 连接，转化至大肠杆菌DH10Bac 感受态细胞，进行同源重组。经筛选得到重组杆状病毒载体Bacmid-pFastBac1-FVO， PCR 鉴定得到单一条带；用该重组载体转染sf9 细胞，收获毒种并进行表达；对表达产物进行SDS-PAGE 、Western blot 检测。成功构建了FVO 的杆状病毒表达载体，并在sf9 细胞中得到了表达，Western blot 检测出现1 条约40 kD 的带。

P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响

惠焕动,刘勇,刘少君

2013, 0(10): 165-169.

摘要 ( 272 )

PDF (2323KB) ( 652 )

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构建PcDNA3.1/necdin 真核表达载体并制备稳定过表达Necdin 的P19 细胞克隆，检测稳定过表达Necdin 对P19 细胞增殖的影响。从正常培养P19 细胞提取RNA 反转录成cDNA，以此作为PCR 模板扩增得到necdin 目的基因，插入PcDNA3.1 载体的EcoR Ⅰ 和Xho Ⅰ 位点；脂质体法将构建的真核表达载体PcDNA3.1/necdin 转染P19 细胞，G418 筛选后挑取细胞单克隆， Western 印迹鉴定细胞单克隆中Necdin 的表达水平。CCK-8 法检测过表达necdin 对P19 细胞增殖的影响。成功构建PcDNA3.1/ necdin 真核表达载体并获得稳定高表达Necdin 的P19 细胞克隆，检测发现P19 细胞过表达Necdin 后其细胞增殖未发生明显变化。P19 细胞稳定过表达外源Necdin 对其细胞增殖无明显影响。

在人胚胎干细胞中高效表达PELO蛋白

胡旭林,纪家葵

2013, 0(10): 170-176.

摘要 ( 345 )

PDF (2429KB) ( 1025 )

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以PELO 全长cDNA 为模板，采用TOPO 克隆的方法，将人的PELO 基因克隆到pENTR-D-TOPO 载体上，形成pENTR-D-PELO 克隆载体。然后通过同源重组将含有EF1α 启动子的pENTR-5’-EF1α 和pENTR-D-PELO 重组到表达载体p2k7 上，形成EF1α-PELO-p2k7 表达载体。将构建好的PELO 高表达载体在293FT 细胞中制备成相应的慢病毒表达载体，并用慢病毒侵染人胚胎干细胞，最终成功实现在人胚胎干细胞中稳定且高效地表达PELO 蛋白。

单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

刘秀侠,杨雄,陈红英

2013, 0(10): 177-183.

摘要 ( 299 )

PDF (2634KB) ( 971 )

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为深入研究2F5 和4E10 抗体，构建了特异性识别HIV-1 病毒MPER 区域的2F5 和4E10 单链抗体的重组质粒，进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR 扩增及基因重组技术，获得2F5-scFv 和4E10-scFv 基因，将其插入原核表达载体pET-28a（+）上，获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21（DE3）及Rosetta-gami2（DE3）pLysS 中，IPTG 诱导表达，SDS-PAGE 检测发现，2F5-scFv 和4E10-scFv 在两种表达菌中均以包涵体形式存在，重组蛋白分子量分别约为27 kD 、29 kD 。变性条件下，利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化，经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA 检测表明，制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER 抗原都有特异性结合活性。

2003-2012年斑马鱼基因遗传领域主题演化分析

白云霄,孙巍,张学福

2013, 0(10): 184-188.

摘要 ( 250 )

PDF (2017KB) ( 502 )

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通过主题聚类、突发主题词探测和主题演化关键路径绘制三种方法剖析了斑马鱼基因遗传领域主题演化的过程。着重分析了领域主题网络中的主题域、热点主题和关键节点，为从事斑马鱼基因遗传领域及相关领域的初级科研人员提供一个概览，为从事主题演化领域研究的科研人员提供方法借鉴。

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