隐球酵母vps41Δ菌株转化条件优化及突变体库构建

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (12): 151-155.

隐球酵母vps41Δ菌株转化条件优化及突变体库构建

宋瑛瑾, 刘晓光

工业发酵微生物教育部重点实验室工业酶国家工程实验室天津市工业微生物重点实验室
天津科技大学生物工程学院，天津 300457

收稿日期:2013-05-25 出版日期:2013-12-20 发布日期:2013-12-20
作者简介:宋瑛瑾，女，硕士研究生，研究方向：微生物与生化药学；E-mail：853462601@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31070125）

Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation of Cryptococcus neoformans vps41 Δ and Construction of a Insertional mutagenesis Library

Song Yingjin, Liu Xiaoguang

Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology，Ministry of Education，National Engineering Laboratory for Industrial
Enzymes，Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology，the College of Biotechnology，
Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457

Received:2013-05-25 Published:2013-12-20 Online:2013-12-20

摘要/Abstract

摘要： 新型隐球酵母（Cryptococcus neoformans）是一种重要的条件致病性真菌。前期试验证实VPS41基因参与隐球酵母的氮源饥饿应答反应并影响其致病性。系统研究了影响农杆菌介导的vps41Δ饥饿应答缺陷型菌株关键因素，并利用优化的农杆菌转化体系构建了包含5 000多个转化子的vps41Δ菌株的T-DNA插入突变体库，为下一步筛选鉴定隐球酵母VPS41饥饿应答信号通路中的其他相关基因提供了基础材料。

关键词: 新型隐球酵母, 根瘤农杆菌, vps41Δ, T-DNA, 突变体库

Abstract: Cryptococcus neoformans is a major human opportunistic fungal pathogens. The previous work has shown that VPS41 gene contributes to virulence by mediating nitrogen starvation response. In this study, major factors affecting the efficiency of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of vps41Δ were systematically investigated, and optimized parameters were used to construct an insertional metagenesis library of the deletion mutant containing over 5 000 transformants. The availability of this insertional library could facilite the screening and identification of other genes involved in the signaling pathway of starvation response of C. neoformans.

Key words: Cryptococcus neoformans, Agrobacterium tumefaciens, vps41Δ, T-DNA, Mutant library

宋瑛瑾, 刘晓光. 隐球酵母vps41Δ菌株转化条件优化及突变体库构建[J]. 生物技术通报, 2013, 0(12): 151-155.

Song Yingjin, Liu Xiaoguang. Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation of Cryptococcus neoformans vps41 Δ and Construction of a Insertional mutagenesis Library[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(12): 151-155.

参考文献

[1] Nielsen K, De Obaldia AL, Heitman J. Cryptococcus neoformans mates
on pigeon guano：implications for the realized ecological niche and globalization[J]. Eukaryotic cell, 2007, 6（6）：949-959.
[2] Perfect JR, Wong B, Chang YC, et al. Cryptococcus neoformans ：viru-
lence and host defences[J]. Medical nycology, 1998, 36（Suppl.1）：79-86.
[3] Liu X, Hu G, Panepinto J, et al. Role of a VPS41 homologue in starv-ation response, intracellular survival and virulence of Cryptococcus neoformans [J]. Molecular Microbiology, 2006, 61（5）：1132-1146.
[4] 迟彦, 周东坡, 平文祥, 等. 根癌农杆菌介导的真菌遗传转化及其应用[J]. 菌物学报, 2005, 24（4）：612- 619.
[5] Zhong YH, Wang XL, Wang TH, et al. Agrobacterium-mediated transformation（AMT）of Trichoderma reesei as an efficient tool for random insertional mutagenesis[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2007, 73（6）：1348-1354.
[6] 张君胜, 饶志明, 吴蕾, 等. 根癌农杆菌介导酿酒酵母的遗传转化[J]. 食品与生物技术学报, 2006, 3：37-40+92.
[7] Groot MJA, Bundock P, Hooykaas PJJ, et al. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of filamentous fungi[J]. Nature Biotechnology, 1998, 16：839-842.
[8] Covert SF, Kapoor P, Lee M, et al. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Fusarium circinatum [J]. Mycological Research, 2001, 105（3）：259-264..
[9] 蔡琪敏, 蒋冬花, 嵇豪, 等. 农杆菌介导的紫色红曲霉遗传转化体系的建立和优化[J]. 微生物学杂志, 2010, 30（5）：68-73.
[10] 高兴喜, 杨谦. 根癌农杆菌介导的球毛壳菌遗传转化及T-DNA插入突变体的获得[J]. 微生物学报, 2005（1）：129-131.
[11] 陈强, 沈晨杰, 吴鹏, 左开井. ATM法转黄萎病菌的条件优化及转GFP的单孢的获得[J]. 上海交通大学学报：农业科学版, 2009（5）：485-488, 500.
[12] 王杰, 林俊芳, 郭丽琼. 影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究[J]. 华南农业大学学报, 2010, 31（1）：38-41.
[13] 方卫国, 张永军, 杨星勇, 等. 根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2002, 22（5）：40-44.
[14] McClelland CM, Chang YC, Kwon-Chung KJ. High frequency transformation of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii by Agrobacterium tumefaciens [J]. Fungal Genetics and Biology, 2005, 42（11）：904-913.
[15] 李中明, 潘皎, 朱旭东. 利用根癌农杆菌 T-DNA 插入突变寻找参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因[J]. 微生物学报, 2012, 52（1）：44-51.