甘蔗转基因甘露糖筛选系统的建立

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.014

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (1): 92-97.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.014

甘蔗转基因甘露糖筛选系统的建立

王文治杨本鹏蔡文伟冯翠莲王俊刚熊国如张树珍

（中国热带农业科学院甘蔗研究中心中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海口 571101）

收稿日期:2014-06-12 出版日期:2015-01-09 发布日期:2015-01-10
作者简介:王文治，男，硕士研究生，助理研究员，研究方向：甘蔗基因工程；E-mail：wangwenzhi@itbb.org.cn
基金资助:
现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-20-2-5），Cry1Ac-2A-gna融合基因遗传转化甘蔗的研究项目（31101197，2012-2014）

Establishment of Mannose Selection System in Sugarcane Transformation

Wang Wenzhi, Yang Benpeng, Cai Wenwei, Feng Cuilian, Wang Jungang, Xiong Guoru, Zhang Shuzhen

（Sugarcane Research Center of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops Ministry of Agriculture，Haikou 571101）

Received:2014-06-12 Published:2015-01-09 Online:2015-01-10

摘要/Abstract

摘要： 以甘露糖作为筛选底物，对甘蔗品种新台糖22号进行临界筛选浓度测定，获得愈伤组织的继代、分化、生根的临界筛选浓度。而后应用含有甘露糖筛选标记基因pmi及绿色荧光蛋白报告基因GFP的植物表达载体，通过农杆菌介导法对新台糖22号的愈伤组织进行遗传转化。用所测定的临界筛选浓度先后进行继代、分化、生根筛选培养，获得抗性植株。对获得的抗性植株分别进行pmi基因和GFP基因的PCR检测，以及GFP显微镜荧光检测，结果证实已成功建立了高效的甘蔗转基因甘露糖筛选系统。

关键词: 甘蔗转基因, 甘露糖, pmi基因, GFP基因

Abstract: In this research the killing curve of mannose was tested at the subculture，differentiation and rooting stages of sugarcane cultivar ROC22. Then the expression cassette containing a pmi selection marker gene and a GFP report gene was transformed into sugarcane embryonic callus by Agrobacterium-mediated method. Resistant plants were obtained after selection by Mannose. The PCR detection result and GFP microscope observation result both show that our lab had established a high efficiency PMI/Mannose selection system in sugarcane transformation.

Key words: sugarcane transgenic, mannose, pmi gene, GFP gene

王文治,杨本鹏,蔡文伟,冯翠莲,王俊刚,熊国如,张树珍. 甘蔗转基因甘露糖筛选系统的建立[J]. 生物技术通报, 2015, 31(1): 92-97.

Wang Wenzhi, Yang Benpeng, Cai Wenwei, Feng Cuilian, Wang Jungang, Xiong Guoru, Zhang Shuzhen. Establishment of Mannose Selection System in Sugarcane Transformation[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(1): 92-97.

参考文献

[1] 高世武, 阙友雄, 郭晋隆, 等.甘露糖筛选系统的建立及在甘蔗转基因中的应用[J].热带作物学报, 2010, 31（5）：789-796.
[2] Malca I, Endo RM, Long MR. Mechanism of glucose co-unteraction of inhibition of root elongation by galactose, mannose and glucosamine[J]. Phytopathology, 1967, 57：272-278.
[3] Joersbo M, Okkels FT. A novel principle for selection of transgenic plant cells：Positive selection[J]. Plant Cell Reports, 1996, 16：219-221.
[4] Joersbo M, Donaldson I, Kreiberg J, et al. Analysis of mannose selection used for transformation of sugar beet[J]. Molecular Breeding, 1998, 4：111-117.
[5] Paola L, Xu DY, Ingo P. Effective selection and regeneration of transgenic rice plants with mannose as selective agent[J]. Molecular Breeding, 2001, 7：43-49.
[6] Negrotto D, Beer S, Wenck AR, et al. The use of phosphomannose-isomerase as a selectable marker to recover transgenic maize plants[J]. Plant Cell Reports, 2000, 19：789-803.
[7] 梁永亚, 李浩, 段永波, 等.以pmi 为筛选标记的水稻转基因研究[J].安徽农业科学, 2011, 39（17）：10143-10146.
[8] 岳建雄, 孟钊红, 张炼辉, 等.以甘露糖作为筛选剂的棉花遗传转化[J].棉花学报, 2005, 17（1）：3-7.
[9] 彭世清, 陈守才.甘露糖阳性选择系统的建立及在番茄转化中的应用[J].农业生物技术学报, 2005, 13（2）：141-144.
[10] 黄皓, 雷建军, 曹必好, 等.利用pmi为筛选基因对辣椒进行Bt基因转化的研究[J].辣椒杂志, 2013, 2：23-28.
[11] 曾黎辉, 徐海峰, 王会全, 等. PMI基因最为选择标记的植物表达载体构建及其在雪柑转基因中的应用[J].农业生物技术学报, 2008, 16（5）：858-864.
[12] 郭倩倩, 孙熙森, 唐益雄, 等.新型筛选标记磷酸甘露糖异构酶基因在转基因植物中的应用[J].中国农业科技导报, 2011, 13（6）：12-19.
[13] Jain M, Chengalrayan K, Abouzid A, et al. Prospecting the utility of a PMI /mannose selection system for the recovery of transgenic sugarcane（Saccharum spp. hybrid）plants[J]. Plant Cell Rep, 2007, 26：581-590.
[14] 郭莺, 阮妙鸿, 吴杨, 等.甘蔗转Hc-Pro基因的研究[J].热带作物学报, 2010, 31（6）：965-971.
[15] 朱丽, 傅亚萍, 刘文真, 等.利用共转化和华药培养技术快速获得无选择标记的三价转基因水稻[J].中国水稻科学, 2007, 21（5）：475-481.
[16] Cao MX, Huang JQ, Wei ZM, et al. Agrobacterium-mediated multiple gene transformation in rice using a single vector[J]. J Integr Plant Biol, 2005, 47（2）：233-242.

甘蔗转基因甘露糖筛选系统的建立

Establishment of Mannose Selection System in Sugarcane Transformation

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 12

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	张磊, 杨沐迪, 董顺, 刘明秋. 运用全因子试验方法优化单抗生物类似药生产过程中的糖基化分布[J]. 生物技术通报, 2019, 35(3): 217-224.
[2]	刘戬丰,王艳丽,李相敢. 甘露糖筛选体系及在转基因玉米商业化中的应用[J]. 生物技术通报, 2014, 0(9): 13-21.
[3]	倪玉佳, 周旻昱, 欧阳嘉, 郑兆娟, 勇强. 黑曲霉嗜热β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析[J]. 生物技术通报, 2014, 0(6): 181-186.
[4]	王莹;罗国坤;韩烈保;. 结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定[J]. , 2011, 0(08): 118-122.
[5]	谢广成;李丹彤;周立敬;. 刺参甘露糖结合凝集素的生物信息学分析[J]. , 2011, 0(02): 136-140.
[6]	高小倩;张春晓;陈晓波;王丽丽;仪宏;. 大肠杆菌甘露糖异构酶(MI)基因克隆及功能研究[J]. , 2010, 0(11): 219-222.
[7]	程志号;惠荣奎;蔡明历;郝大翠;刘焰;. GFP基因转化藿香的研究[J]. , 2010, 0(08): 116-119.
[8]	陈奇;王阁奇;马莉;陈丽梅;. 洋桔梗的转基因研究[J]. , 2010, 0(03): 109-113.
[9]	吴海琴;赵瑛;符庆功;王华森;. 番茄叶片GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因表达载体的构建与转化[J]. , 2010, 0(02): 154-156.
[10]	孙仲序;杨红花;崔得才;赵春芝;赵淑萍. 转抗盐基因八里庄杨组培苗快繁研究[J]. , 2002, 0(04): 43-46.
[11]	. 文摘[J]. , 2002, 0(03): 56-57.
[12]	. 食品上的应用[J]. , 1991, 0(09): 103-107.