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小分子RNA表达载体构建的新方法——MicroRNA前体PCR置换法

陈锐;胡正;张辉;   

  1. 中国农业科学院作物科学研究所;
  • 出版日期:2010-07-26 发布日期:2010-07-26
  • 基金资助:
    “863”计划(2007AA10Z139)

  • Published:2010-07-26 Online:2010-07-26

摘要: MicroRNA(miRNA)基因的终产物是进化上高度保守的、具有基因表达调控功能的非编码小分子RNA。miRNA的特征性发卡环前体(pre-miRNAs)在体内经数步加工后,与AGO蛋白构成沉默复合体(RISC)以行使其功能。如将已知pre-miRNAs上的miRNA成熟链和互补链(miRNA*)分别置换为有待研究的小分子RNA,并构建表达载体转化植株,利用转化株内源的miRNA成熟加工体系,可以产生预设的小分子RNA。利用已知拟南芥miRNA前体为模板,使用替换PCR的方法,人工构建了gso8-ap-miRNA-pBI121表达载体。利用农杆菌介导法转化拟南芥,多数T1代植株表现出提早开花的突变表型。该方法是一种简便、高效的构建小分子RNA表达载体的方法。

关键词: 小分子RNA, MicroRNA, PCR置换法