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丙型肝炎病毒NS3基因对人肝细胞生物学特性的影响

何琼琼;肖旭贤;冯德云;李波;郑晖;程瑞雪;   

  1. 中南大学湘雅基础医学院病理学系,中南大学医学化学研究中心,中南大学湘雅基础医学院病理学系,中南大学湘雅基础医学院病理学系,中南大学湘雅基础医学院病理学系,中南大学湘雅基础医学院病理学系 长沙410078,长沙410078,长沙410078,长沙410078,长沙410078,长沙410078
  • 出版日期:2007-08-26 发布日期:2007-08-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金“HCV蛋白介导的MAPK和NF-κB信号传导途径间cross-talk的机制研究(30270601)“;; “2'-5'寡核苷酸合成酶启动子介导的重组caspase-3系统治疗丙型肝炎的实验研究(30671846)资助

  • Published:2007-08-26 Online:2007-08-26

摘要: 目的:建立稳定转染HCVNS3的人源肝细胞系,探讨HCVNS3对肝细胞生物学特性的影响。方法:通过脂质体将HCVNS3的真核表达质粒稳定转染至QSG7701细胞(pRcHCNS3/QSG细胞),PCR,WesternBlot,免疫组化检测基因的整合和表达;光学显微镜和电子显微镜观察转染前后细胞超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;生长曲线,软琼脂集落实验,成瘤性实验探讨HCVNS3对肝细胞增殖的影响。结果:HCVNS3基因在pRcHCNS3/QSG细胞中得到整合和表达,定位于细胞浆。形态学显示出增殖旺盛的的特点,流式细胞仪检测pRcHCNS3/QSG细胞G0/G1期细胞数目减少而S期细胞数目增加,生长曲线和软琼脂集落实验表明pRcHCNS3/QSG细胞倍增时间明显缩短,停泊非依赖性生长能力明显增强,并能接种裸鼠成瘤,免疫组化证实肿瘤组织有HCVNS3蛋白表达。电镜和流式细胞仪检测显示HCVNS3能促进pRcHCNS3/QSG细胞凋亡。但其促增殖速度远大于凋亡率,表现为pRcHCNS3/QSG细胞获得恶性表型和致瘤性。结论:HCVNS3能明显促进人肝细胞QSG7701恶性转化,pRcHCNS3/QSG细胞可作为研究HCVNS3致癌机理的细胞模型。

关键词: 丙型肝炎病毒, 基因转染, 生物学特性