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高羊茅胚性悬浮细胞系的快速建立及其单细胞培养

杨帆;韩烈保;   

  1. 北京林业大学草坪研究所暨森林培育与保护省部共建实验室;长江大学园艺园林学院;
  • 出版日期:2009-04-26 发布日期:2009-04-26
  • 基金资助:
    国家“863”计划(2006AA10Z132);; “十一五”国家科技支撑项目(2006BAD01A19,2006BAC18B04-1);; 北京市重点实验室和北京市重点学科专项

  • Published:2009-04-26 Online:2009-04-26

摘要: 本研究采用高羊茅(Millennium和Hundog Ⅴ)成熟种子为材料,以MS为基本培养基,通过添加2.5 mg/L Cu-SO4.5H2O,或提高NH4NO3浓度至2.5 g/L等措施均能明显提高愈伤组织的质量,经过3~5个月的筛选获得疏松干燥、颗粒状、生长旺盛、适合悬浮培养的Ⅱ型胚性愈伤组织。悬浮培养初期需用MSⅠ液体培养基进行一个月的启动培养,之后转用MSⅡ继代保持,约2个月左右即建立起来自高羊茅2个品种的3个悬浮细胞系。生长特性测定结果表明,悬浮培养的初始接种量以1.0~3.0 ml/40 ml为宜,生长周期内其pH值不断波动变化,最适范围在5.0~5.7之间。5~8 d为悬浮系的对数生长期,此时细胞分裂旺盛,增殖较快,是分离单细胞的最佳时期。单细胞培养方式以悬浮培养效果最好。

关键词: 愈伤组织, 胚性悬浮细胞, 单细胞培养, 高羊茅