靶向HBs基因的shRNA表达载体的构建及其抑制HepG2.2.15表达HBVsAg的作用

靶向HBs基因的shRNA表达载体的构建及其抑制HepG2.2.15表达HBVsAg的作用

杨尚君;王亚平;唐恩洁;张国元;

重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室;川北医学院免疫与分子生物研究所;川北医学院附属医院检验科;

出版日期:2009-11-26 发布日期:2009-11-26

Published:2009-11-26 Online:2009-11-26

摘要/Abstract

摘要： 探索用PGenesil-1(Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑制作用。设计、合成靶向HBVS区的3对DNA序列,分别插入PGenesil-1中构建3个siRNA表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,经限制性内切酶,DNA序列测定等技术鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量后,分别或按不同组合转染HepG-2.2.15细胞,48h后采用半定量RT-PCR检测HBVsmRNA转录水平,免疫细胞化学技术检测HBsAg表达水平,MEIA分别检测细胞裂解液和培养上清中HBsAg和HBeAg的表达水平。结果表明,HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3均能不同程度地抑制HepG2.2.15细胞中的HBsAg、HBeAg合成和HBs-mRNA转录。成功构建的HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,其中PgS3能显着抑制HBsAg表达(P<0.01)。多种表达载体联合对抗原表达的抑制作用效率不同。

关键词: 乙型肝炎病毒, 小发夹结构RNA, RNA干扰, 乙型肝炎病毒表面抗原

杨尚君;王亚平;唐恩洁;张国元;. 靶向HBs基因的shRNA表达载体的构建及其抑制HepG2.2.15表达HBVsAg的作用[J]. .

[1]	刘晓玫, 王东鑫, 张春, 魏双施. AAV介导的RNAi对SARS-CoV-2 S基因表达的抑制作用[J]. 生物技术通报, 2022, 38(3): 188-193.
[2]	郭宇飞, 闫荣媚, 张小茹, 曹威, 刘浩. 代谢工程改造黑曲霉生产葡萄糖二酸[J]. 生物技术通报, 2022, 38(11): 227-237.
[3]	潘银来, 邱春辉, 王艺磊, 张子平. RNA药物的发展及其在水产上的应用[J]. 生物技术通报, 2021, 37(2): 203-215.
[4]	邓普荣, 刘勇波. RNAi与转Bt基因技术协同抗虫研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(10): 216-224.
[5]	徐雪亮, 王奋山, 刘子荣, 范琳娟, 季香云, 蒋杰贤, 姚英娟. RNA干扰技术在昆虫学领域研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(1): 255-261.
[6]	杨文文, 倪嘉瑶, 胡蕊洁, 王华忠. 一个RNAi载体上反向重复片段的测序策略[J]. 生物技术通报, 2020, 36(5): 205-210.
[7]	宋华丽, 孙效迎, 孔祥会, 李莉, 裴超. RNA干扰技术在水产动物抗病毒和抗寄生虫研究中的应用研究进展[J]. 生物技术通报, 2020, 36(2): 193-205.
[8]	许祥, 董维鹏, 张少华, 冯晨毅, 刘田福, 燕炯. Fsp27基因沉默载体的构建及其对细胞脂解的影响研究[J]. 生物技术通报, 2020, 36(1): 88-94.
[9]	韩翠翠, 刘立琨, 王玉春, 杨莹, 刘吉成, 周忠光. TOX3基因RNAi慢病毒载体的构建及对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖的影响[J]. 生物技术通报, 2019, 35(7): 141-147.
[10]	王佳悦, 刘香男, 彭康莉, 赵博. RNA干扰USE1基因慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 生物技术通报, 2019, 35(3): 117-122.
[11]	陈静, 张道伟, 钱正敏. 白背飞虱几丁质合成酶1基因的结构及特性研究[J]. 生物技术通报, 2018, 34(1): 195-201.
[12]	苏子敬, 李巧玲, 黄程, 谢成建, 杨星勇. RNAi技术及其在真菌基因功能研究中的应用[J]. 生物技术通报, 2015, 31(8): 50-58.
[13]	温宪春, 韩翠翠, 赵月生, 于海涛, 李成冲, 岳丽玲. FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 231-236.
[14]	邓帅,张婷婷,王茹茹,刘宇,张元湖^{. 植物非细胞自主性小RNA分子研究进展[J]. 生物技术通报, 2015, 31(10): 16-23.}
[15]	石萌, 刘小宁, 马纪. 利用细菌表达dsRNA介导黄粉虫抗冻蛋白基因的RNA干扰[J]. 生物技术通报, 2014, 0(8): 113-119.

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