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精子介导法生产转基因牦牛杂种胚胎的研究

字向东;梁冠男;陈绍威;   

  1. 西南民族大学动物遗传育种学教育部重点实验室;
  • 出版日期:2010-08-26 发布日期:2010-08-26
  • 基金资助:
    四川省学术和技术带头人培养基金资助项目

  • Published:2010-08-26 Online:2010-08-26

摘要: 研究外源DNA转染对牦牛精子体外受精(IVF)、早期胚胎发育以及绿色荧光蛋白(GFP)基因在早期胚胎表达的影响。用构建融合人乳铁蛋白基因绿色荧光蛋白表达载体(pAcGFP1-hLF)转染的牦牛精子IVF黄牛卵母细胞,生产的胚胎在荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果显示,用环形质粒、线性质粒pAcGFP1-hLF转染的精子及未转染精子IVF后的卵裂率分别为56.4%、54.8%和61.0%,线性转染的囊胚率显着低于环形转染(17.7%与35.7%)。环形质粒转染的精子用DNaseⅠ消化、不消化及未转染的精子IVF后卵裂率分别为44.8%、55.2%和56.3%,囊胚率分别为33.3%、33.3%和30.2%。未经DNaseⅠ消化洗涤的环形质粒组GFP胚胎阳性率显着高于线性质粒组(99.3%与76.6%);DNaseⅠ消化组GFP胚胎阳性率极显着低于不消化组(25.4%与99.3%)。结果表明,用环形质粒DNA转染牦牛精子不会影响其受精及早期胚胎发育能力,但DNaseⅠ消化洗涤显着降低GFP胚胎阳性率。

关键词: 牦牛, 精子介导基因转移, 胚胎体外生产, 绿色荧光蛋白