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动物病原大肠杆菌K88的绿色荧光蛋白基因标记及其稳定性研究

车建美;刘波;蓝江林;   

  1. 福建省农业科学院农业生物资源研究所;
  • 出版日期:2010-09-26 发布日期:2010-09-26
  • 基金资助:
    国家科技部重大科技专项(2008ZX07425-002);; 福建省财政专项-福建省农业科学院科技创新团队建设基金项目(STIF-Y03)

  • Published:2010-09-26 Online:2010-09-26

摘要: 成功地将gfp/luxAB双标记基因整合到K88染色体上,得到绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌K88∶gfp/lux,其菌体和菌落形态与原始菌株K88完全一致,引入的新质粒不影响菌株的基本形态。从含gfp基因的质粒DNA和K88∶gfp/lux基因组DNA上均可扩增出大小约700 bp的gfp基因片段。大肠杆菌特异性基因检测结果表明,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约260 bp的大肠杆菌特异性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株均为大肠杆菌。在相同的培养条件下,K88∶gfp/lux和K88的生长曲线的变化趋势基本相同。通过检测肠毒性基因(estA)发现,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约158 bp的肠毒性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株在肠毒性方面未发生变化。在无选择压力条件下将K88∶gfp/lux菌株每隔12 h连续转接10次后,所有菌落均保持着均匀并且强烈的绿色荧光,说明标记基因在K88∶gfp/lux中的表达稳定性很高。K88∶gfp/lux和K88在中性偏酸性的环境中生长较好,当初始pH值偏碱性时,生长较差。

关键词: 大肠杆菌K88, 绿色荧光蛋白, gfp/luxAB基因