人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

张嘉萱;卢嘉欣;王蕊;赵振岭;韩波;彭鑫磊;陈伟;刘忠;任哲;王绍祥;马岩岩;刘凯胜;王一飞;

暨南大学生物医药研究开发基地;

出版日期:2011-08-26 发布日期:2011-08-26
基金资助:
国家十一五“863”课题(2007AA02Z142)

Published:2011-08-26 Online:2011-08-26

摘要/Abstract

摘要： 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词: TRAP1, Hsp75, 克隆, 原核表达, 优化, pET-28a(+), BL21

张嘉萱;卢嘉欣;王蕊;赵振岭;韩波;彭鑫磊;陈伟;刘忠;任哲;王绍祥;马岩岩;刘凯胜;王一飞;. 人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化[J]. .

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