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Xfect介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3高效转染Vero细胞的方法及其条件的优化

薛礼长;杨慧兰;   

  1. 华南理工大学生物科学与工程学院;中国人民解放军广州军区广州总医院;
  • 出版日期:2011-01-26 发布日期:2011-01-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(30972666);; 全军医学科学技术研究“十一五”计划资助项目(06J008)

  • Published:2011-01-26 Online:2011-01-26

摘要: 旨在用Xfect试剂介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3转染Vero细胞,以期获得转染效率较高的方法,并检测目标片段的表达,从而为进一步研究HSV-2 LAT基因及其ORF3片段的生物学功能奠定基础。用Xfect试剂介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3转染Vero细胞,48 h后观察荧光表达情况,并计算不同转染方法分别在有无血清及质粒与Xfect Polymer比例不同时的转染效率。用RT-PCR检测ORF3片段在Vero细胞中的表达。结果显示,采用贴壁转染法,在有血清及质粒与Xfect Polymer比例为5μg/2μL时转染效率较高;RT-PCR可以获得目的条带,证明ORF3片段在Vero细胞中得到表达。本试验获得的优化条件可以显着提高Xfect Polymer对Vero细胞的转染效率;以绿色荧光蛋白作为标签鉴定目的基因在细胞中表达的方法切实可行。

关键词: Xfect, 转染效率, Vero细胞, 绿色荧光蛋白