转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0788

生物技术通报 ›› 2019, Vol. 35 ›› Issue (3): 6-12.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0788

转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测

金永梅, 马瑞, 于志晶, 林秀峰

吉林省农业科学院农业生物技术研究所,长春 130124

收稿日期:2018-09-10 出版日期:2019-03-26 发布日期:2019-04-03
作者简介:金永梅,女,研究员,研究方向：水稻生物技术育种;E-mail：ymjin0303@163.com
基金资助:
国家转基因重大项目（2016ZX08001001-001-007）,吉林省农业科技创新工程项目（CXGC2017TD009）,吉林省科技发展计划重点科技攻关项目（20160204033NY）

Integration Analysis of Exogenous Gene and Line-Specific Detection in the Insect-Resistant cry1C-Transgenic Rice Jishengjing3

JIN Yong-mei, MA Rui, YU Zhi-jing, LIN Xiu-feng

Agro-Biotechnology Research Institute,Jilin Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130124

Received:2018-09-10 Published:2019-03-26 Online:2019-04-03

摘要/Abstract

摘要： 利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对分析确定其插入位点,发现T-DNA在水稻基因组（日本晴）2号染色体上的基因间区2790685-2790589位点（GenBank登记号：NC_029257.1）。根据T-DNA插入位点,在插入位点两侧基因组区域和T-DNA左边界设计特异性引物,建立了吉生粳3号事件特异性PCR检测方法,为吉生粳3号的身份识别提供了准确、快速的检测技术手段。

关键词: 转Cry1C基因抗虫水稻, 旁侧序列, 插入位点, 事件特异性检测

Abstract: The flanking sequences of exogenous gene conferring insect-resistant cry1C-transgenic rice line Jishengjing3 and its inserted sites were analyzed by genome walking PCR,and a line-specific PCR detection method was established. T-DNA was found to be in nucleotides 2 790 685 to 2 790 589（GenBank accession number：NC_029257.1）in the chromosome 2 of Oryza Sativa（Japonica）genome after aligning the flanking sequences in left and right borders of Jishengjing3’s exogenous gene with the rice’s genome and T-DNA sequences. Based on the T-DNA insertion site,specific primers in the 2-sides region of the inserted site and the left border of T-DNA region were designed,and a event-specific PCR detection method for Jishengjing3 was established,which may provide accurate and rapid detection approach for identifying Jishengjing3.

Key words: insect-resistance cry1C-transgenic rice, flanking sequences, insertion site, event-specific detection

金永梅, 马瑞, 于志晶, 林秀峰. 转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测[J]. 生物技术通报, 2019, 35(3): 6-12.

JIN Yong-mei, MA Rui, YU Zhi-jing, LIN Xiu-feng. Integration Analysis of Exogenous Gene and Line-Specific Detection in the Insect-Resistant cry1C-Transgenic Rice Jishengjing3[J]. Biotechnology Bulletin, 2019, 35(3): 6-12.

参考文献

[1] 李黎红, 叶卫军, 郭龙彪. 我国转基因水稻研究进展和商业化前景分析[J]. 中国稻米, 2012, 18(6):1-4.
[2] Tinland B.The integration of T-DNA into plant genomes[J]. Trends Plant Sci, 1996, 1(6):178-184.
[3] 杨继芳, 刘明, 安利佳. T-DNA整合的研究进展[J]. 遗传, 2004, 26(6):991-996.
[4] Oosumi T, Ruiz-Rojas JJ, Veilleux RE, et al.Implementing reverse genetics in rosaceae:analysis of T-DNA flanking sequences of insertional mutant lines in diploid strawberry, fragaric vesca[J]. Physiol Plant, 2010, 1(140):1-9.
[5] 申爱娟, 陈松, 周晓婴, 等. 转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测[J]. 江苏农业学报, 2014, 30(1):14-20.
[6] Dong Y, Jin X, Tang Q, et al.Development and event-specific detection of transgenic glyphosate-resistant rice expressing the G2-EPSPS gene[J]. Front Plant Sci, 2017, 8:885.
[7] Yang L, Yang Y, Jin W, et al.Development and interlaboratories validation of event-specific quantitative real-time PCR method for genetically modified rice G6H1 event[J]. J Agric Food Chem, 2018, 66(30):8179-8186.
[8] 张大兵, 郭金超. 转基因生物及其产品检测技术和标准化[J]. 生命科学, 2011, 23(2):195-204.
[9] 魏岁军, 邓力华, 肖国樱. 转基因水稻EB7001S事件特异性检测方法的建立[J]. 农业生物技术学报, 2014, 22(5):621-631.
[10] 金永梅, 马瑞, 于志晶, 等. 转基因水稻吉生粳2号的外源基因旁侧序列分离及事件特异性PCR检测方法[J]. 东北农业科学, 2016, 41(1):14-19.
[11] 林拥军, 张启发.改造合成的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因Cry1C*:中国, CN1483823A[P]. 2002.
[12] Tang W, Chen H, Xu C, et al.Development of insect-resistant transgenic indica rice with a synthetic Cry1C* gene[J]. Mol Breeding, 2006, 18(1):1-10.
[13] 于志晶, 刘丽, 李淑芳, 等. 转Cry1C*基因抗虫水稻的培育[J]. 分子植物育种, 2011, 9(6):702-708.
[14] 崔莹. 二价抗虫基因cry1C*/cry2A*对寒区超级稻松粳9号的遗传转化[D]. 哈尔滨:黑龙江大学, 2011.
[15] 姚瑶, 钱雪艳, 李闯, 等. 抗虫基因Cry1C转化大豆的研究[J]. 安徽农业科学, 2014, 42(35):12461-12463.
[16] 贾宝辉, 李娜, 于希森, 等. 大豆胚尖转化体系优化和cry1C*基因转化大豆的研究[J]. 大豆科学, 2015, 34(5):910-913, 917.
[17] Du D, Geng C, Zhang X, et al.Transgenic maize lines expressing a cry1C* gene are resistant to insect pests[J]. Plant Mol Bio Rep, 2014, 32:549-557.
[18] 张士龙, 贺正华, 张祖新, 等. 聚合Cry1C*和VHb基因玉米抗虫耐渍新种质的创制[J]. 玉米科学, 2014, 22(2):46-52
[19] 于志晶, 刘丽, 李淑芳, 等. 转Cry1C*基因抗虫水稻的培育[J]. 分子植物育种, 2011, 9(6):702-708
[20] 王关林, 方宏筠. 植物基因工程[M]. 北京:科学出版社, 2002:742-744.
[21] 李亚丽, 刘中来, 周洁, 等. 转mCherry基因水稻遗传分析及T-DNA整合位点的研究[J]. 分子植物育种, 2012, 10(2):121-130.
[22] Cao J, Xu J, Zhao T, et al.Flanking sequence determination and specific PCR identification of transgenic wheat B102-1-2[J]. Prep Biochem Biotechnol, 2014, 44(3):257-265.
[23] Guo B, Guo Y, Hong H, et al.Identification of genomic insertion and flanking sequence of G2-EPSPS and GAT transgenes in soybean using whole genome sequencing method[J]. Front Plant Sci, 2016, 7:1009.
[24] Barakat A, Gallois P, Raynal M, et al.The distribution of T-DNA in the genomes of transgenic Arabidopsis and rice[J]. FEBS Lett, 2000, 471(2-3):161-164.
[25] Takano M, Egawa H, Ikenda JE, et al.The structures of integration sites in transgenic rice[J]. Plant J, 1997, 11(3):353-361.
[26] Alonso JM, Stepanova AN, Leisse TJ et al. Genome wide insertional mutagenesis of Arabidopsis thaliana[J]. Science, 2003(30):1653-1657.
[27] Tzfira T, Li J, Lacroix B, et al.Agrobacterium T-DNA integration:molecules and models[J]. Trends in Genetics, 20(8):375-383.
[28] 郭超, 何行健, 邓力华, 等. 转基因水稻BarKasalath-01事件特异性检测[J]. 分子植物育种, 2017, 15(11):4466-4475.
[29] 金芜军, 宛煜嵩, 贺辉群, 等. 一种鉴定纯合型转基因抗虫水稻品系TT51-1的方法:中国, 103131758A[P].2013-06-05.

转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测

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[1]	冯翠莲, 万玥, 王俊刚, 冯小艳, 赵婷婷, 王文治, 沈林波, 张树珍. 转Cry1Ac-2A-gna基因甘蔗BCG-17转化体特异性检测方法的建立[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 248-258.
[2]	李晓飞,谭小力,李俊,武玉花,曹应龙. 转基因水稻检测用阳性质粒分子的构建及应用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(7): 71-77.
[3]	梁俊婷, 李鹿之, 陈少鹏, 焦浈. 红色荧光蛋白mCherry中插入外源短肽位点的研究[J]. 生物技术通报, 2013, 0(5): 144-148.
[4]	. DNA分析与扩增[J]. , 1993, 0(10): 25-27.