双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立

双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立

张立操;张莲芬;雷楗勇;陈其亮;陈蕴;许泓瑜;许正宏;张雁云;金坚;

江南大学医药学院分子药理研究室;

出版日期:2009-01-26 发布日期:2009-01-26
基金资助:
863探索类项目(2006AA02Z153);; 上海市科学技术委员会生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020)

Published:2009-01-26 Online:2009-01-26

摘要/Abstract

摘要： 为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ-HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。并进行了检测限、精密度、准确度和稳定性等方法学考核。结果表明,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为2μg/ml,抗原浓度在51.88～3320ng/ml范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99,检测限为10ng/ml。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为4.86%和8.08%,回收率为91.9%～110.4%,与IFN-β、IFN-α、HSA、IFNα2b-HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液稀释倍数对该方法无影响,8d连续检测标准曲线表明稳定性良好。这种定量检测IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为当前融合蛋白发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。

关键词: 双抗体夹心, 酶联免疫分析, β干扰素, 人血清白蛋白, 融合蛋白, 定量分析

张立操;张莲芬;雷楗勇;陈其亮;陈蕴;许泓瑜;许正宏;张雁云;金坚;. 双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立[J]. .

[1]	牛宇辉, 李向茸, 吴贝, 李洪珊, 李殿玉, 陈磊, 魏锁成, 冯若飞. 葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞株中rHSA产量的影响[J]. 生物技术通报, 2022, 38(7): 278-286.
[2]	杨佳慧, 孙玉萍, 陆雅宁, 刘欢, 卢存福, 陈玉珍. 拟南芥AtTERT对大肠杆菌非生物胁迫抗性的影响[J]. 生物技术通报, 2022, 38(2): 1-9.
[3]	项明源, 廖倡宇, 江地科, 张鹏飞, 王印, 罗燕, 杨泽晓, 姚学萍. PRRSV NADC30-like SYBR Green I qPCR检测方法的建立与应用[J]. 生物技术通报, 2020, 36(5): 80-85.
[4]	肖政, 范里, 谭文松. 半乳糖流加对CHO细胞生长代谢及其表达的Fc融合蛋白糖基化的影响[J]. 生物技术通报, 2019, 35(8): 138-145.
[5]	邓晓芬, 杨晓佳, 易天红, 冯英, 柯潇, 赖维莉. 融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化[J]. 生物技术通报, 2019, 35(4): 223-228.
[6]	陈欣宁, 赵亮, 范里, 刘旭平, 谭文松. 氨浓度升高对CHO细胞维持期抗体融合蛋白的表达及N-糖基化的影响[J]. 生物技术通报, 2019, 35(3): 93-102.
[7]	顾源, 寻子琦, 郑菲, 涂涛, 姚斌, 罗会颖. 来源于嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802 的类膨胀素基因鉴定及功能探究[J]. 生物技术通报, 2018, 34(10): 172-181.
[8]	王亚美,魏原杰,艾新宇,刘小宁. 棉蚜His-CYP6J1融合蛋白的分离纯化及多克隆抗体的制备[J]. 生物技术通报, 2017, 33(5): 164-169.
[9]	腾桥, 夏丽洁, 张富春. 人GPC3基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 生物技术通报, 2017, 33(11): 188-193.
[10]	黄演婷, 卢雪梅, 杨小蓉, 金小宝, 朱家勇. 重组融合蛋白Trx-IFN-CSP复性工艺研究[J]. 生物技术通报, 2016, 32(6): 219-225.
[11]	彭冬, 杨威, 王昭, 王席, 柳忠玉. GST-SUMO-MT融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达[J]. 生物技术通报, 2016, 32(2): 219-224.
[12]	王云龙, 张春艳, 李玉林, 程蕾, 王继创, 邓黎黎, 米海, 白晓静. EB病毒融合蛋白Zta-P54在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定[J]. 生物技术通报, 2014, 0(7): 173-178.
[13]	冯均尚, 窦文芳, 张晓梅, 许泓瑜, 史劲松, 许正宏. 融合蛋白GGH N端延长类似物的克隆表达、纯化及活性研究[J]. 生物技术通报, 2013, 0(9): 124-129.
[14]	段桂华, 沈姗姗, 诸葛宇征. 改良重叠区扩增法构建Rac1相关质粒[J]. 生物技术通报, 2013, 0(6): 177-182.
[15]	沈娟, 金小宝, 丁静, 朱家勇. 融合蛋白LL-37-haFGF 的复性及纯化条件研究[J]. 生物技术通报, 2013, 0(4): 210-214.

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