黄鳝ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

黄鳝ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

杨浩;陈宏喜;陈欣;杨太有;

河南师范大学生命科学学院;

出版日期:2009-07-26 发布日期:2009-07-26
基金资助:
国家大学生创新性实验计划项目(081047602);; 河南省教育厅自然科学研究项目(2006180017);; 河南省动物学重点学科资助;; 河南师范大学国家级生命科学实验教学示范中心资助

Published:2009-07-26 Online:2009-07-26

摘要/Abstract

摘要： 以黄鳝基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,对各反应因子、引物退火温度和循环参数进行优化。建立了黄鳝的最适ISSR-PCR反应体系,25μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板。最佳反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,48~57℃复性40 s(随引物而确定),72℃延伸1.5 min,循环次数40;72℃延伸10 min。利用所建立的ISSR反应体系,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。

关键词: 黄鳝, ISSR, 正交设计, 反应体系

杨浩;陈宏喜;陈欣;杨太有;. 黄鳝ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化[J]. .

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