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白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中表达纯化及性质研究

赵雪娜;董相陈;侯登勇;孙丽霞;王晶翼;王庆民;   

  1. 齐鲁制药有限公司药物研究院;
  • 出版日期:2010-01-26 发布日期:2010-01-26

  • Published:2010-01-26 Online:2010-01-26

摘要: CRM197是一种白喉毒素突变体,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pET25b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,CRM197获得高效表达,达到菌体总蛋白的20%。目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换、S-100分子筛纯化获得纯度高于95%的CRM197样品,用该蛋白样品免疫新西兰大白兔,免疫兔血清中检测到特异性抗体应答。急性毒性试验中,每只豚鼠皮下注射200μgCRM197纯化样品,未出现明显毒性反应症状,与之相比较,注射后48h内,20ng白喉毒素阳性对照组动物全部死亡。结果表明,利用本试验的表达策略,CRM197得到高效表达,并且具有良好的免疫原性和安全性,为其进一步生产及应用奠定基础。

关键词: CRM197, 白喉毒素, 包涵体, 免疫原性, 急性毒性