抗金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的原核表达及蛋白纯化

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.022

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (11): 194-201.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.022

抗金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的原核表达及蛋白纯化

李晶泉¹, 徐永平^{1, 2}, 王熙涛¹, 李媛¹, 王丽丽^{1, 2}, 李晓宇^{1, 2}

1. 大连理工大学生命科学与技术学院,大连 116024;
2. 教育部动物性食品安全保障技术工程研究中心,大连 116620

收稿日期:2016-03-14 出版日期:2016-11-25 发布日期:2016-11-11
作者简介:李晶泉,女,博士研究生,研究方向：生物化工;E-mail：lijq@takara.com.cn
基金资助:
基金情况：中央高校基本科研业务费（DUT13 JB04）,国家海洋公益项目（201405003-3）

Prokaryotic Expression and Purification of Single-chain Variable Fragment（scFv）Against Staphylococcus aureus

LI Jing-quan¹, XU Yong-ping^{1, 2}, WANG Xi-tao¹, LI Yuan¹, WANG Li-li^{1, 2}, LI Xiao-yu^{1, 2}

1. School of Life Science and Biotechnology,Dalian University of Technology,Dalian 116024;
2. Ministry of Education Center for Food Safety of Animal Origin,Dalian 116620

Received:2016-03-14 Published:2016-11-25 Online:2016-11-11

摘要/Abstract

摘要： 旨在将来源于鸡的金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）进行原核诱导表达,获得有抗体活性的目的蛋白。构建含有目的抗体基因的重组质粒,将此质粒进行原核诱导表达并鉴定所获得蛋白的生物活性。结果显示,（1）成功构建了含有金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的重组质粒pCold I-scFv,质粒成功转化到大肠杆菌表达菌株中;（2）经过诱导表达后,目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中;（3）使用4 mol/L 尿素成功地将包涵体变性溶出;（4）通过柱层析法及透析法获得了纯化及复性效果较好的目的蛋白;（5）间接ELISA鉴定证实所获蛋白具有金黄色葡糖球菌抗体活性。通过质粒构建及原核诱导表达、包涵体溶出和复性等步骤,最终获得了有金黄色葡萄球菌抗体活性的目的蛋白。

关键词: 可溶性表达, 包涵体, 蛋白纯化, 蛋白复性, 有活性的蛋白

Abstract: This work aims to clone and express single-chain variable region fragment（scFv）of Staphylococcus aureus in Escherichia coli,and to obtain the target protein with scFv activity. A plasmid containing target scFv gene was constructed,then transformed into a prokaryotic expression strain to be induced,and the activity of the harvested protein was identified. As results：（1）Recombinant plasmid pCold I-scFv was successfully constructed,and transformed into the expression strain of Escherichia coli.（2）After induction,the target proteins mainly exist in pellet in the form of inclusion bodies. （3）Inclusion body was dissolved successfully using 4 mol/L urea. （4）Purified and renatured target protein by column chromatography and dialysis was favorable. （5）The refolded protein showed specific binding activity with S. aureus in ELISA experiment. Conclusively,the target protein with S. aureus antibody activity was successfully acquired by plasmid construction and prokaryotic expression,inclusion body dissolving and refolding.

Key words: soluble expression, inclusion, protein purification, protein refolding, active protein

李晶泉, 徐永平, 王熙涛, 李媛, 王丽丽, 李晓宇. 抗金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的原核表达及蛋白纯化[J]. 生物技术通报, 2016, 32(11): 194-201.

LI Jing-quan, XU Yong-ping, WANG Xi-tao, LI Yuan, WANG Li-li, LI Xiao-yu. Prokaryotic Expression and Purification of Single-chain Variable Fragment（scFv）Against Staphylococcus aureus[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(11): 194-201.

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抗金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的原核表达及蛋白纯化

Prokaryotic Expression and Purification of Single-chain Variable Fragment（scFv）Against Staphylococcus aureus

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