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莱芜猪心脏cDNA文库的构建与鉴定

李付美;闫顺;曲志才;徐来祥;   

  1. 曲阜师范大学生命科学学院;
  • 出版日期:2010-03-26 发布日期:2010-03-26
  • 基金资助:
    国家科技基础条件平台建设项目(2005DKA21101-07)

  • Published:2010-03-26 Online:2010-03-26

摘要: 以莱芜猪心脏为供试材料,采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA。通过SMART技术反转录合成全长cD-NA,经LD-PCR扩增后与pMD18-T载体连接并转化细菌DH5α,测定滴度和重组率,构建成莱芜猪心脏全长cDNA文库。经初步检测,原始文库的滴度为1.8×105CFU/mL,重组率约为94.4%。从原始文库随机挑取13个单菌落过夜培养,提取质粒,经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,凝胶电泳显示插入片段大小在0.3-2.0kb之间。

关键词: 莱芜猪, 心脏, cDNA文库, SMART技术