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NtSKP1基因的反义载体构建及转基因烟草的产生

张付云;李伟;张瑛;孙秋颖;李研;杜昱光;   

  1. 大连水产学院;中国科学院大连化学物理研究所辽宁省碳水化合物研究重点实验室;
  • 出版日期:2010-04-26 发布日期:2010-04-26
  • 基金资助:
    国家高技术研究发展计划“863”项目(2006AA10A213);; 国家高技术研究发展计划"863"项目(2007AA091601);; 中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2-YW-G-041,KSCX2-YW-N-007);; 辽宁省自然科学基金项目(20082153)

  • Published:2010-04-26 Online:2010-04-26

摘要: 根据枯斑三生烟SKP1基因(NtSKP1)的序列,设计一对分别含有特定酶切位点的特异引物,以重组质粒pMD18-SKP1为模板,扩增目的基因(约473bp)片段。将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL的内含子右侧,再经NotⅠ酶切回收约3443bp的目的片段,插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含NtSKP1基因片段反向序列的植物表达载体pART27-skp1a,其转录产物能减弱目的基因的表达。将pART27-skp1a质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得转基因烟草。

关键词: NtSKP1基因, 反义表达载体的构建, 转基因烟草