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鼠OAZ1基因的真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

刘梦瑶;韩钰;蔡富强;何玲;王艳林;   

  1. 三峡大学医学院三峡大学分子生物学研究所;
  • 出版日期:2010-09-26 发布日期:2010-09-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(30772590)

  • Published:2010-09-26 Online:2010-09-26

摘要: 构建鼠OAZ1基因真核表达质粒,观察OAZ1-GFP融合蛋白在绿猴肾细胞COS7中的表达。利用RT-PCR的方法获得鼠OAZ1基因,再利用重叠延伸PCR缺失掉OAZ1序列中的205位碱基T,由此获得无需阅读框移码即可编码全长OAZ1的突变基因。将此突变基因克隆入真核表达载体pEGFP-N1获得重组质粒pEGFP-N1-OAZ1-T。将此质粒瞬时转染COS7后,采用RT-PCR,Western blotting,免疫荧光技术观察检测目的基因的表达情况。结果显示,酶切和测序证明质粒pEG-FP-N1-OAZ1-T构建正确,转染COS7细胞后,OAZ1-GFP融合蛋白能在细胞中高效表达。成功构建了pEGFP-N1-OAZ1-T真核表达质粒,在COS7细胞内,该质粒能成功指导OAZ1-GFP融合蛋白合成。

关键词: OAZ, 多胺代谢, 融合蛋白, 真核表达