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番茄内质网ω-3脂肪酸去饱和酶基因原核表达载体的构建与鉴定

丁一;王华森;于超;   

  1. 浙江农林大学农业与食品科学学院;
  • 出版日期:2012-01-26 发布日期:2012-01-26
  • 基金资助:
    浙江省省基金项目(Y3110340);;

  • Published:2012-01-26 Online:2012-01-26

摘要: 通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到内质网ω-3脂肪酸去饱和酶(LeFAD3)基因的部分编码区,该片段cDNA为309 bp,将其克隆到pET-30a(+)载体中,酶切位点分别是BamHⅠ和SacⅠ,构建了原核表达载体pET-LeFAD3,并在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,经IPTG诱导蛋白表达,提取蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。酶切鉴定结果表明,LeFAD3基因原核表达载体构建成功,目的蛋白成功表达。

关键词: 番茄, 内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶, 原核表达载体