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烟草HrBP的研究与应用

陈卓;于丹丹;郭勤;刘家驹;王贞超;李向阳;毕亮;胡德禹;杨松;宋宝安;   

  1. 贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地;
  • 出版日期:2012-09-26 发布日期:2012-09-26
  • 基金资助:
    国家重点基础研究发展计划项目(“973”计划)(2010CB-126105);;

  • Published:2012-09-26 Online:2012-09-26

摘要: 旨在进一步发掘HrBP在新农药创制和抗病品种选育等方面的价值,采用BLAST和Clustal X2软件对HrBP进行序列同源性分析,发现其序列较保守;采用PSIPRED Protein Structure Prediction在线服务器进行烟草HrBP二级结构预测,采用UCLDepartment of Computer Science进行HrBP跨膜结构预测,发现两种可能存在的跨膜方式;采用SWISS-MODEL、Phyre和CPH进行HrBP空间结构预测,发现以膜蛋白为模板进行模建的蛋白具有相似的空间结构;建立基于Real-time PCR的HrBP mRNA定量分析方法,其相关系数为0.999 6;通过ProtScale方法分析HrBP抗原指数,并获得序列特异性较高的多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法制备多肽,并由此制备多克隆抗体,采用Indirect-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,表明多克隆抗体可特异识别烟草HrBP。采用DIBA和Western blotting试验研究多克隆抗体对常见植物的抗原识别特性,发现多克隆抗体对这些植物的HrBP均有一定识别能力。此外,采用Real-time PCR和Indirect-ELISA等方法进行烟草各组织部位HrBP的表达量的研究,发现HrBP在各组织部位存在差异表达。

关键词: Harpin结合蛋白, 生物信息学分析, 基因克隆表达, 多克隆抗体制备, 烟草组织差异表达