单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (10): 177-183.

单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

刘秀侠,杨雄,陈红英

（西北农林科技大学生命科学学院，杨陵 712100）

收稿日期:2013-02-04 修回日期:2013-10-15 出版日期:2013-10-14 发布日期:2013-10-15
作者简介:刘秀侠，女，硕士研究生，研究方向：分子病毒学；E-mail ：liuxiuxia0208@126.com
基金资助:
教育部新世纪优秀人才计划（NCET-09-0625）

The Prokaryotic Expression，Purification and Identification of Single Chain Antibodies 2F5 and 4E10

Liu Xiuxia, Yang Xiong, Chen Hongying

（College of Life Sciences，Northwest A&F University，Yangling 712100）

Received:2013-02-04 Revised:2013-10-15 Published:2013-10-14 Online:2013-10-15

摘要/Abstract

摘要：

为深入研究2F5 和4E10 抗体，构建了特异性识别HIV-1 病毒MPER 区域的2F5 和4E10 单链抗体的重组质粒，进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR 扩增及基因重组技术，获得2F5-scFv 和4E10-scFv 基因，将其插入原核表达载体pET-28a（+）上，获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21（DE3）及Rosetta-gami2（DE3）pLysS 中，IPTG 诱导表达，SDS-PAGE 检测发现，2F5-scFv 和4E10-scFv 在两种表达菌中均以包涵体形式存在，重组蛋白分子量分别约为27 kD 、29 kD 。变性条件下，利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化，经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA 检测表明，制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER 抗原都有特异性结合活性。

关键词: HIV-1, gp41, MPER, 2F5, 4E10, 单链抗体

Abstract:

For further study of 2F5 and 4E10 antibody, 2F5-scFv and 4E10-scFv were expressed and purified from E.coli cells. The 2F5scFv and 4E10-scFv genes were amplified by overlapping PCR. Recombinant vectors pET28a/2F5-scFv and pET28a/4E1-scFv were constructed and transformed into E. coli BL21（DE3）and Rosetta-gami2（DE3）pLysS, and protein expression was induced with IPTG. 2F5-scFv and 4E10-scFv were expressed, with the molecular weight of 27 kD and 29 kD, respectively. The formed inclusion bodies in E. coli. Denatured single chain antibody proteins, which were purified by nickel chelating chromatography and refolded by dialysis, showed specific reactivates to both MPER antigens prepared from prokaryotic and eukaryotic expression systems.

Key words: HIV-1, gp41, MPER, 2F5, 4E10, Single-chain antibody

刘秀侠,杨雄,陈红英. 单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定[J]. 生物技术通报, 2013, 0(10): 177-183.

Liu Xiuxia Yang Xiong Chen Hongying . The Prokaryotic Expression，Purification and Identification of Single Chain Antibodies 2F5 and 4E10[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(10): 177-183.

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