转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.015

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (12): 105-109.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.015

转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化

崔学强^1,2,张树珍²,沈林波²,冯翠莲²

1. 海南大学农学院，海口 570228；2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海口 571101

收稿日期:2015-05-21 出版日期:2015-12-19 发布日期:2015-12-19
作者简介:崔学强，男，硕士研究生，研究方向:植物细胞与分子生物学；E-mail:yncuixueqiang@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101197)，现代农业产业技术体系建设专项基金(CARS-20-2-5)

The Optimization of Southern Blot for Transgenic Sugarcane Plants

Cui Xueqiang^1,2, Zhang Shuzhen², Shen Linbo², Feng Cuilian²

1. College of Agriculture，Hainan University，Haikou 570228；2. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，CATAS，Sugarcane Research Center，Ministry of Agriculture Key Biotechnology Laboratory for Tropical Crops，Haikou 571101

Received:2015-05-21 Published:2015-12-19 Online:2015-12-19

摘要/Abstract

摘要： 对甘蔗Southern杂交体系的优化，旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料，就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面，对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明，改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求；PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高，更适合用于Southern杂交；40 μg的DNA在400 μL酶切体系中，酶切10 h可获得良好的酶切效果；杂交温度40℃，杂交18 h，可获得清晰的杂交条带。

关键词: 甘蔗, Southern杂交, 地高辛, PCR法标记探针, 酶切

Abstract: Using sugarcane as materials, the DIG-labeled Southern blot was optimized through several key aspects:the comparison of different-labeled probe methods, extraction of sugarcane genome DNA, the amount of enzyme digestion of genome DNA, enzyme digestion time and a serial of procedures in the process of the hybrid. The results showed that sugarcane DNA extracted by the improved CTAB method met the requirements of the latter experiments, the efficiency of PCR-labeled probe was higher than that of random primer-labeled probe, so PCR-labeled probe method was suitable for the Southern blot, 40 μg DNA samples in enzyme digestion system of 400 μL for 10 hours could achieved desirable digestion result；while hybrid temperature was 40℃ and hybridizing time was 18 h, a clear hybridization band could be observed. The optimization of sugarcane Southern blot provides a reference for the analysis of Southern blot of transgenic sugarcane.

Key words: sugarcane, Southern blot, digoxigenin, PCR-labeled probe, enzyme digestion

崔学强,张树珍,沈林波,冯翠莲. 转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化[J]. 生物技术通报, 2015, 31(12): 105-109.

Cui Xueqiang, Zhang Shuzhen, Shen Linbo, Feng Cuilian. The Optimization of Southern Blot for Transgenic Sugarcane Plants[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(12): 105-109.

参考文献

[1]Southern EM. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis[J]. Journal of Molecular Biology, 1975, 98(3):503-517.
[2]H?ltke HJ, Ankenbauer W, Mühlegger K, et al. The digoxigenin(DIG)system for non-radioactive labelling and detection of nucleic acids[J]. Cellular and Molecular Biology(Noisy-le-Grand, France), 1995, 41(7):883-905.
[3]McCabe MS, Power JB, de Laat AMM, et al. Detection of single-copy genes in DNA from transgenic plants by nonradioactive Southern blot analysis[J]. Molecular Biotechnology, 1997, 7(1):79-84.
[4]Matthews JA, Kricka LJ. Analytical strategies for the use of DNA probes[J]. Analytical Biochemistry, 1988, 169(1):1-25.
[5]周长发, 张锐, 张晓, 等. 地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化[J]. 中国农业科技导报, 2009, 4:123-128.
[6]梁海泳, 夏秀英, 高晓蓉, 等. 反义4CL与UGPase双价基因在烟草中的转化及表达分析[J]. 植物学通报, 2007, 4:459-464.
[7]Saika H, Sakamoto W, Maekawa M, et al. Highly efficient visual selection of transgenic rice plants using green fluorescent protein or anthocyanin synthetic genes[J]. Plant Biotechnol, 2011, 43(4):284-291.
[8]代军. Southern杂交技术在农作物遗传转化研究中的应用[J]. 安徽农业科学, 2015, 1:20-23.
[9]刘烜, 郑文杰, 赵卫东, 等. 转基因油菜地高辛标记 DNA 探针杂交检测方法的建立[J]. 口岸卫生控制, 2005, 10(4):10-12.
[10] 刘禄, 牛焱焱, 雷昊, 等. 基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证[J]. 植物遗传资源学报, 2012, 2:182-188.
[11] Setta ND, Monteiro-Vitorello CB, Metcalfe CJ, et al. Building the sugarcane genome for biotechnology and identifying evolutionary trends[J]. Bmc Genomics, 2014, 15(4):116-119.
[12] 王晓音, 赵婷婷, 冯翠莲, 等. DNA提取方法对转基因甘蔗PCR检测的影响[J]. 热带生物学报, 2011, 2:138-142.
[13] 王关林, 方宏筠. 植物基因工程[M]. 第2版. 北京:科学出版社, 2002.
[14] 董玉玮, 邱龙, 李培青, 等. PCR和随机引物标记探针的方法比较[J]. 生物学杂志, 2007, 1:63-66.
[15] 孔冉. KP4基因遗传转化甘蔗的研究[D]. 海口:海南大学，2012.

转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化

The Optimization of Southern Blot for Transgenic Sugarcane Plants

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	赵雪婷, 高利燕, 王俊刚, 沈庆庆, 张树珍, 李富生. 甘蔗AP2/ERF转录因子基因ShERF3的克隆、表达及其编码蛋白的定位[J]. 生物技术通报, 2023, 39(6): 208-216.
[2]	李心怡, 姜春秀, 薛丽, 蒋洪涛, 姚伟, 邓祖湖, 张木清, 余凡. 多荧光标记引物增强甘蔗染色体寡聚核苷酸探针杂交信号[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 103-111.
[3]	黄佳艳, 冯小艳, 沈林波, 王文治, 胡海燕, 张树珍. 甘蔗ShPR10基因的克隆及其编码蛋白与甘蔗线条花叶病毒P1蛋白的互作研究[J]. 生物技术通报, 2023, 39(10): 163-174.
[4]	高小宁, 刘睿, 吴自林, 吴嘉云. 宿根矮化病抗感甘蔗品种茎部内生真菌和细菌群落特征分析[J]. 生物技术通报, 2022, 38(6): 166-173.
[5]	赵婷婷, 王俊刚, 王文治, 冯翠莲, 冯小艳, 张树珍. 甘蔗单糖转运蛋白基因ShSTP7序列分析及组织表达特征测定[J]. 生物技术通报, 2022, 38(4): 72-78.
[6]	张靖, 尤垂淮, 曹月, 崔天真, 杨靖涛, 罗俊. 甘蔗根际微生态及其与黑穗病防治之间的关系[J]. 生物技术通报, 2022, 38(11): 21-31.
[7]	王智博, 王道平, 苗兰, 李瑛, 潘映红, 刘建勋. 血液样本蛋白质组分析方法的比较研究[J]. 生物技术通报, 2021, 37(8): 307-318.
[8]	冯翠莲, 万玥, 王俊刚, 冯小艳, 赵婷婷, 王文治, 沈林波, 张树珍. 转Cry1Ac-2A-gna基因甘蔗BCG-17转化体特异性检测方法的建立[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 248-258.
[9]	徐美慧, 张耀杰, 唐克轩, 苗志奇. GoldenBraid酶切连接反应体系的优化[J]. 生物技术通报, 2020, 36(9): 266-274.
[10]	冯翠莲, 张树珍. 抗虫转基因甘蔗的培育及其抗性丧失的防控策略[J]. 生物技术通报, 2020, 36(7): 209-219.
[11]	牟永莹, 王道平, 陈明, 邱丽娟, 潘映红. 大豆种子蛋白质组样品制备与数据分析方法[J]. 生物技术通报, 2020, 36(12): 247-255.
[12]	林美璇, 周小满, 关锋, 崔文璟. 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C的异源表达和应用[J]. 生物技术通报, 2020, 36(1): 81-87.
[13]	甘崇琨, 周慧文, 陈荣发, 范业赓, 丘立杭, 黄杏, 李杨瑞, 卢星高, 吴建明. 化学调控在甘蔗生产上的研究应用[J]. 生物技术通报, 2019, 35(2): 163-170.
[14]	张保青, 邵敏, 黄玉新, 黄杏, 宋修鹏, 陈虎, 王盛, 谭秦亮, 杨丽涛, 李杨瑞. 甘蔗抗坏血酸过氧化物酶基因ScAPX1的克隆和表达分析[J]. 生物技术通报, 2019, 35(12): 31-37.
[15]	郭莺 ,汪文华 ,刘黎卿 ,胡敏. 甘蔗宿根矮化病多克隆抗体和免疫磁珠的制备[J]. 生物技术通报, 2018, 34(6): 79-83.