生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (10): 177-183.
刘秀侠,杨雄,陈红英
Liu Xiuxia, Yang Xiong, Chen Hongying
摘要:
为深入研究2F5 和4E10 抗体,构建了特异性识别HIV-1 病毒MPER 区域的2F5 和4E10 单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR 扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv 和4E10-scFv 基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+) 上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3) 及Rosetta-gami2(DE3)pLysS 中,IPTG 诱导表达,SDS-PAGE 检测发现,2F5-scFv 和4E10-scFv 在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD 、29 kD 。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA 检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER 抗原都有特异性结合活性。