植物叶片基因组DNA快速提取方法

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (9): 51-57.

植物叶片基因组DNA快速提取方法

迟婧^1,2,耿丽丽²,高继国¹,束长龙²,张杰^1,2,

1.东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030;
2.中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193

收稿日期:2014-03-04 出版日期:2014-09-15 发布日期:2014-09-07
作者简介:迟婧，女，硕士研究生，研究方向：植物生物化学与分子生物学；E-mail：chijing0225@126.com
基金资助:
国家“863”课题资助项目（2012AA020204）.

A Rapid and Simple Method for DNA Extraction from Plant Leaves

Chi Jing^1,2,Geng Lili², Gao Jiguo¹, Shu Changlong²,Zhang Jie^1,2

1. College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030;
2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests，Institute of Plant Protection，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193

Received:2014-03-04 Published:2014-09-15 Online:2014-09-07

摘要/Abstract

摘要： 为了满足分子生物学研究中大量植株基因需要PCR检测的需求，建立了一种无需研磨、无需有机试剂抽提的快速提取植物叶片基因组DNA的方法。通过比较基因组DNA的浓度及PCR检测结果，获得了最佳提取条件，即约50mg叶片加入150μL含1%β-巯基乙醇的TE提取液，快速破碎1min。破碎后的样品4℃13500×g离心1min，上清于-20℃冷冻后室温融解，4℃、13500×g离心1min，离心后收集的上清溶液即可用于PCR检测。整个提取过程仅需10-12min，具有样品用量小、操作简单、廉价、高效等优点。使用此方法提取的烟草、水稻、大豆、玉米、油菜和花生的基因组DNA均可用于PCR扩增，并可成功扩增长度为3244bp的基因片段。此方法提取的基因组DNA也可用于对未知基因的扩增，获得4条新的花生actin基因序列。

关键词: 基因组DNA, 快速提取, 细胞破碎法, PCR扩增

Abstract: In order to resolve the needs of PCR analysis of a large number of plants in study on molecular biology, we established a convenient and quick method for extraction of genomic DNA from plant leaves without grounding or organic reagents. The genomic DNA was isolated using TE buffer containing 1% beta-mercaptoethanol and crushed by a mini-beadbeater tissue homogenizer. Through the comparison of concentration and purity of genomic DNA and the results of PCR analysis, it indicated that the supernatant collected after quick frozen was suitable for PCR analysis. The whole protocol only takes 10-12 minutes, and it is a simple, efficient and economic method which needs less amount of samples. The genomic DNA of tobacco, rice, soybean, maize, rape and peanut extracted by this methord is suitable for PCR amplicafition. A 3 244 bp gene can be amplified and 4 new actin genes of peanuts are obtained using genomic DNA isolated by this method.

Key words: Genomic DNA, Rapid extraction , Cell disruption, PCR amplification

迟婧,耿丽丽,高继国,束长龙,张杰,. 植物叶片基因组DNA快速提取方法[J]. 生物技术通报, 2014, 0(9): 51-57.

Chi Jing,Geng Lili, Gao Jiguo, Shu Changlong,Zhang Jie. A Rapid and Simple Method for DNA Extraction from Plant Leaves[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(9): 51-57.

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