丝状真菌PCR模板DNA的快速制备方法

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.010

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (9): 79-83.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.010

丝状真菌PCR模板DNA的快速制备方法

罗中钦¹, 程琳², 张茜³, 陈国华¹

1.中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081
2.山西师范大学生命科学学院，临汾 041004
3. 北京师范大学生命科学学院，北京 100875

收稿日期:2015-01-09 出版日期:2015-09-15 发布日期:2015-09-16
作者简介:罗中钦，男，博士，研究方向：蔬菜病原微生物致病机理；E-mail：lzhqin@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31301618)

A Rapid Method of Preparing DNA Template of Filamentous Fungi for PCR Amplification

Luo Zhongqin¹, Cheng Lin², Zhang Xi³, Chen Guohua¹

1. Institude of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081
2. College of Life Science，Shanxi Normal University，Linfen 041004
3. College of Life Science，Beijing Normal University，Beijing 100875

Received:2015-01-09 Published:2015-09-15 Online:2015-09-16

摘要/Abstract

摘要：

以尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为材料，旨为建立沸水浴获得PCR模板DNA的新方法。取少量真菌菌丝置于一定体积50 mmol/L NaOH溶液中沸水浴10 min，再加入1/10体积1 mol/L Tris-HCl(pH8.0)缓冲液，12 000 r/min离心后，上清用作PCR的DNA模板。结果显示，该方法扩增效率高，扩增条带清晰，且Taq酶适应性强，适合快速制备丝状真菌的模板DNA。该方法经济、简单、快速、安全高效，可用于丝状真菌转化子的高通量筛选和菌株的快速鉴定。

关键词: 丝状真菌, 尖孢镰刀菌, PCR扩增, Taq DNA聚合酶

Abstract:

This work aims to establish a novel method of extracting DNA template of filamentous fungi for PCR amplification with boiling-water bath and Fusarium oxysporum as raw material. The procedures of this method are as the following：exposing the fungal mycelia in certain volume of 50 mmol/L NaOH solution under boiling water bath, adding 1/10 volume of 1mol/L Tris-HCl(pH8.0)buffer, centrifuging it at 12 000 r/min for 10 min, and using the supernatant as the DNA template for PCR amplification. Results demonstrated that the efficiency of PCR amplification with the DNA template prepared by the method was high, the amplified bands were clear, and adaptability to various Taq DNA polymerases was strong；This indicated that the method was suitable for the preparation of DNA template of filamentous fungi. Conclusively, this method is economic, simple, rapid, safe and high-efficient, and can be utilized for high-throughput screening of filamentous fungal transformants and rapid identification of isolated strains.

Key words: filamentous fungi, Fusarium oxysporum, PCR amplification, Taq DNA polymerase

罗中钦, 程琳, 张茜, 陈国华. 丝状真菌PCR模板DNA的快速制备方法[J]. 生物技术通报, 2015, 31(9): 79-83.

Luo Zhongqin, Cheng Lin, Zhang Xi, Chen Guohua. A Rapid Method of Preparing DNA Template of Filamentous Fungi for PCR Amplification[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(9): 79-83.

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A Rapid Method of Preparing DNA Template of Filamentous Fungi for PCR Amplification

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