一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.011

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 68-72.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.011

一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法

向小华^1，2, 焦禹顺^1，2, 吴新儒¹, 程亚增^1，2, 侯烁^1，3, 刘贯山¹, 王元英¹

（1.中国农业科学院烟草研究所中国农业科学院烟草遗传改良与生物技术重点开放实验室，青岛 266101；2.中国农业科学院研究生院，北京， 100081；3.青岛农业大学农学与植物保护学院，青岛 266109）

收稿日期:2014-08-27 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:向小华，男，博士研究生，研究方向：烟草分子育种；E-mail：xiangxiaohuacaas@163.com
基金资助:
公益行行业专项（201203091），国家烟草专卖局重点项目（110201002002）

A Method of Recovering Short DNA Fragments from Non-denaturing Polyacrylamide Gel

Xiang Xiaohua^1，2, Jiao Yushun^1，2, Wu Xinru¹, Cheng Yazeng^1，2, Hou Shuo^1，3, Liu Guanshan¹, Wang Yuanying¹

（1. Tobacco Research Institute of CAAS，Key Laboratory of Tobacco Genetic Improvement and Biotechnology，CAAS，Qingdao 266101；2. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081；3. College of Agriculture and Plant Protection，Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109）

Received:2014-08-27 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： 利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法，也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法（液氮研磨+煮沸+低温浓缩）、煮沸法及直取法回收小片段DNA，以回收样品模板进行第二次PCR扩增，结果表明：改良方法回收的DNA 的纯度高，特异性好，回收率与经典煮沸法相当。在保证回收产物的特异性时，用低温浓缩法替代乙醇/醋酸钠共沉淀也具有可行性及一定的创新性。

关键词: 非变性聚丙烯凝胶, DNA小片段, 二次PCR, 改良煮沸法, 胶回收

Abstract: The polyacrylamide gel electrophoresis with high resolution is a top choice for isolating and purifying specific short DNA fragments, and also serves as a prerequisite for a variety of subsequent molecular biology experiments. In this study, three methods, i.e., modified boiling method（grinding with liquid nitrogen + boiling + concentrating at low temperature）, traditional boiling method（in which DNA is precipitated with absolute ethanol and 3 mol/L sodium acetate together）, and direct recovery method were used to extract short DNA fragments. The short DNA fragments were used as the template for a second PCR reaction. The results showed that recovered DNA fragments by the modified boiling method had higher purity and finer specificity, and the recovery rate was nearly the same as the traditional boiling method. Replacing the method of precipitation with ethanol and sodium acetate by method of concentrating at low temperature is feasible and novel.

Key words: non-denaturing polyacrylamide gel, short DNA fragments, secondary PCR, modified boiling method, gel recovery

向小华, 焦禹顺, 吴新儒, 程亚增, 侯烁, 刘贯山, 王元英. 一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 68-72.

Xiang Xiaohua, Jiao Yushun, Wu Xinru, Cheng Yazeng, Hou Shuo, Liu Guanshan, Wang Yuanying. A Method of Recovering Short DNA Fragments from Non-denaturing Polyacrylamide Gel[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 68-72.

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一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法

A Method of Recovering Short DNA Fragments from Non-denaturing Polyacrylamide Gel

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