适于双向电泳分析的酵母胞外蛋白提取方法

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.012

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 73-77.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.012

适于双向电泳分析的酵母胞外蛋白提取方法

杜维¹, 朴永哲², 黄玮¹, 谷月¹, 赵长新¹

（1.大连工业大学生物工程学院，大连 116034；2.大连民族学院，大连 116600）

收稿日期:2014-09-12 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:杜维, 男, 硕士,研究方向:酵母蛋白质组学；E-mail：foredu119@hotmail.com

Procedure to Prepare Samples for Two-dimensional Electrophoresis of Secreted Proteins from Saccharomyces cerevisiae

Du Wei¹, Piao Yongzhe², Huang Wei¹, Gu Yue¹, Zhao Changxin¹

（1. School of Biological Engineering，Dalian Polytechnic University，Dalian 116034；2. Dalian Nationalities University，Dalian 116600）

Received:2014-09-12 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： 采用了无蛋白酵母培养基培养FFC2144酵母细胞，用硫铵沉淀法、超滤法、冻干酚提等方法提取酵母胞外蛋白，计算3种方法的提取率并分别用双向电泳的方法对提取到的蛋白样品进行分离，同时运用质谱鉴定分离后蛋白。其中冻干-平衡酚法提取后得到114个蛋白点，提取率为73.67%，图谱识别的蛋白点最多图谱最清晰，是研究分泌类蛋白质组学理想的分离方法。

关键词: 酿酒酵母, 胞外蛋白, 双向电泳, 提取方法

Abstract: Saccraomyces cerevsiae FFC2144 was cultured in nitrogen base medium without protein. The secretory proteins of yeasts were extracted by ammonium sulfate precipitation, ultrafiltration and lyophilization-phenol extraction respectively. Extraction rates by 3 methods were calculated and the proteins were separated by two-dimensional electrophoresis. The proteins isolated were confirmed by MALDI-TOF-MS. The extraction rate by lyophilization-phenol method was 73.67% and 114 protein spots were obtained with the most protein spots and clearest electrophoretogram. Lyophilization-phenol method could be an ideal separation method for studying secretory proteomics.

Key words: Saccharomyces cerevisiae, secretory protein, two-dimensional electrophoresis, extraction method

引用本文

杜维, 朴永哲, 黄玮, 谷月, 赵长新. 适于双向电泳分析的酵母胞外蛋白提取方法[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 73-77.

Du Wei, Piao Yongzhe, Huang Wei, Gu Yue, Zhao Changxin. Procedure to Prepare Samples for Two-dimensional Electrophoresis of Secreted Proteins from Saccharomyces cerevisiae[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 73-77.

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