羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.017

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (6): 111-115.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.017

羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化

高航¹ 高玉亮² 李葵花¹

1.延边大学农学院，延吉 133002；2.延边朝鲜族自治州农业科学院，龙井 133400

收稿日期:2014-10-13 出版日期:2015-06-19 发布日期:2015-06-20
作者简介:高航，女，硕士研究生，研究方向：园艺学；E-mail：1547493298@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31260470)，延边大学启动金项目(2011800-601010018)

Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation System for Brassica oleracea var. acephala with Hypocotyls as Explants

Gao Hang¹, Gao Yuliang², Li Kuihua¹

1. Agricultural College of Yanbian University，Yanji 133002；2. Yanbian Agricultural Sciences Academy，Longjing 133400

Received:2014-10-13 Published:2015-06-19 Online:2015-06-20

摘要/Abstract

摘要： 以红鸥羽衣甘蓝下胚轴为试材，首先优化了不定芽分化体系，其次探讨了农杆菌介导遗传转化过程中农杆菌侵染浓度、侵染时间对不定芽分化率的影响及不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力，最后对抗性植株进行了潮霉素B筛选基因的PCR检测。结果表明，在MS + 6-BA 5.0 mg/L+AgNO₃ 9.0 mg/L培养基中不定芽分化率最高，为84.17%；农杆菌侵染浓度OD₆₀₀值为0.5、侵染5 min时利于遗传转化，分化率为69.17%；不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力分别为4.0 mg/L和30.0 mg/L；潮霉素B筛选基因的PCR鉴定结果，在预期的602 bp处出现了条带，初步证明潮霉素B筛选基因已整合到羽衣甘蓝基因组中。

关键词: 羽衣甘蓝, 农杆菌侵染效率, 潮霉素筛选压力浓度

Abstract: An efficient transformation method for kale(Brassica oleracea var. acephala)cultivar Hongou was developed using hypocotyls as explant tissues with the following 3 steps：firstly optimizing the differentiation system of adventitious buds；secondly investigating the effects of Agrobacterium infection concentration and time on differentiation rate and the selective concentration of Hygromicin B(Hyg)gene during differentiation and rooting of adventitious buds；finally verifying the selective gene Hyg in the resistant plants by PCR. The highest differentiation rate(84.17%)of adventitious buds was found on MS + 6-BA 5.0 mg/L + AgNO₃ 9.0 mg/Lmedium. An infection concentration OD₆₀₀ of Agrobacterium as 0.5 and infection time for 5 min were favorable for genetic transformation, and the differentiation rate was 69.17%. The selective concentration of Hyg during the differentiation and rooting of adventitious buds were 4.0 mg/Land 30.0 mg/L, respectively. Moreover, the amplified specific gene Hyg bands were observed at the expected 602 bp by PCR analysis, which preliminarily demonstrated that the screened gene Hyg was integrated into the B. oleracea var. acephala genome.

Key words: Brassica oleracea var. acephala, Agrobacterium infection efficiency, selective concentration of hygromycin B

高航, 高玉亮, 李葵花,. 羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化[J]. 生物技术通报, 2015, 31(6): 111-115.

Gao Hang, Gao Yuliang, Li Kuihua. Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation System for Brassica oleracea var. acephala with Hypocotyls as Explants[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(6): 111-115.

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羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化

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