多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.010

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (7): 64-68.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.010

多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分

余婧^1，2, 郭玉双¹, 林世锋¹, 余世洲¹, 赵杰宏¹

(1.贵州省烟草科学研究院烟草行业烟草分子遗传重点实验室，贵阳 550081；2.贵州烟叶复烤有限责任公司铜仁复烤厂，铜仁 554300)

收稿日期:2014-10-30 出版日期:2015-07-16 发布日期:2015-07-16
作者简介:余婧，女，硕士，农艺师，研究方向：烟草转基因检测及烟草生物技术；E-mail：yujingbio@126.com
基金资助:
贵州省科技支撑计划农业攻关[黔科合NY(2013)3020号]

A Multiplex PCR for Rapid Detection of Genetically Modified Ingredient in Flue-cured Tobacco

Yu Jing^1，2, Guo Yushuang¹, Lin Shifeng¹, Yu Shizhou¹, Zhao Jiehong¹

(1. Tobacco Molecular Genetics Key Laboratory of China Tobacco，Guizhou Academy of Tobacco Science of CNTC，Guiyang 550081；2. Tongren Factory of Guizhou Tobacco Leaf Redrying Co.，Ltd，Tongren 554300)

Received:2014-10-30 Published:2015-07-16 Online:2015-07-16

摘要/Abstract

摘要： 为提高烟叶转基因成分检测效率，建立了烤后烟叶中3种外源基因成分的多重PCR检测技术体系，通过优化该反应体系中的Mg²⁺、dNTP、rTaq酶、引物浓度及退火温度等参数，实验最适条件为将4对相等摩尔浓度引物预先按1:1:1:1(V/V)混合，在Mg²⁺为1.5 mmol/L、dNTP为125 μmol/L、rTaq酶 1 U、混合引物1 μmol/L，DNA 100 ng，退火温度65℃，循环数35个的反应条件下，在一次PCR反应中便可同时检测烟草内源基因NR，外源基因35S启动子、NOS终止子、NPT II筛选标记基因。优化后的反应体系能够有效地检测出转基因烤后烟叶百分比含量为0.9%(V/V)的转基因成分。

关键词: 多重PCR, 烤后烟叶, 转基因成分

Abstract: In order to improve the efficiency of detecting genetically modified ingredient(GMI), we established a multiplex PCR detecting 3 exogenous gene ingredients in flue-cured tobacco. By optimizing the concentrations of Mg²⁺, dNTP, rTaq, and primer as well as annealing temperature in the multiplex PCR system, the result showed that the optimal conditions for the experiment were：4 pairs of primers pre-mixed in ratio of 1∶1∶1∶1(V/V), Mg²⁺ 1. 5 mmol/L, dNTP 125 μmol/L, rTaq polymerase 1 U, mixed primers 1 μmol/L, DNA 100 ng annealing temperature 65℃, and 35 reaction cycles；under the above conditions, the system detected 1 tobacco endogenous gene NR, exogenous gene 35S promoter, NOS terminator and selectable marker NPT II gene by 1 PCR reaction. In this study, the optimized multiplex PCR could efficiently detect the GMI of 0.9%(V/V)in transgenic flue-cured tobacco.

Key words: multiplex PCR, flue-cured tobacco, GMO ingredient

余婧, 郭玉双, 林世锋, 余世洲, 赵杰宏. 多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分[J]. 生物技术通报, 2015, 31(7): 64-68.

Yu Jing, Guo Yushuang, Lin Shifeng, Yu Shizhou, Zhao Jiehong. A Multiplex PCR for Rapid Detection of Genetically Modified Ingredient in Flue-cured Tobacco[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(7): 64-68.

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多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分

A Multiplex PCR for Rapid Detection of Genetically Modified Ingredient in Flue-cured Tobacco

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