NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.021

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (6): 148-154.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.021

NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

刘鹏展¹, 黄绮玲², 何小维¹, 李文美^1,2, 张文琪¹, 张赛²

1. 华南理工大学食品科学与工程学院，广州 510640
2. 广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510663

收稿日期:2015-08-28 出版日期:2016-06-27 发布日期:2016-06-28
作者简介:刘鹏展，女，硕士，研究方向：功能碳水化合物材料理论与技术；E-mail：liupengzhan8023@126.com

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Specifically Against Human NT-proBNP

LIU Peng-zhan¹, HUANG Qi-ling², HE Xiao-wei¹, LI Wen-mei^1，2, ZHANG Wen-qi¹, ZHANG Sai²

1. School of Food Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou 510640
2. Guangzhou Wondfo Biotech Corporation Ltd.，Guangzhou 510663

Received:2015-08-28 Published:2016-06-27 Online:2016-06-28

摘要/Abstract

摘要： 旨在制备并鉴定抗人NT-proBNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-proBNP蛋白免疫Balb/c小鼠，取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合，经HAT筛选和有限稀释法亚克隆，获得阳性杂交瘤细胞株，用动物体内诱生法制备腹水，用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化，并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明，获得4株能稳定分泌抗人NT-proBNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类，1G12和1B2为IgG2a型，2D11为IgG1型，3D5为IgG2b型；1G12，1B2和3D5的抗体效价达到10⁶，而2D11的效价仅达10⁴。特异性好，1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×10¹¹、1.07×10¹²、2.31×10¹²和6.33×10¹⁰。成功制备了特异性抗人NT-proBNP单克隆抗体。

关键词: NT-proBNP, 单克隆抗体, 间接ELISA法

Abstract: This study aims to prepare and identify monoclonal antibodies specifically against human NT-proBNP. Balb/c mice was immunized with labeled recombinant protein NT-proBNP，then the spleen cells with high titer of the mice’s serum were fused with SP2/0 myeloma cells. Further，the positive hybridoma cell lines were established after HAT selection and subcloning by limiting dilution，ascites were prepared by injecting cells to mice’s abdomen，and monoclonal antibodies were purified by caprylic acid-ammonium sulfate precipitation method. Finally，basic functions of these monoclonal antibodies such as subclasses，titers，specificity，affinity constants were analyzed. Four positive hybridoma cell lines stably secreting human monoclonal antibodies of anti-NT-proBNP were screened out，and named as 1G12，1B2，3D5，and 2D11；1G12 and 1B2 belonged to IgG2a，2D11 to IgG1，and 3D5 to IgG2b. The titers of 1G12，1B2 and 3D5 reached 10⁶，while the titer of 2D11 only was 10⁴. The affinity constants of 1G12，1B2，3D5 and 2D11 were 9.32×10¹¹，1.07×10¹²，2.31×10¹²，and 6.33×10¹⁰，respectively. In conclusion，the monoclonal antibody of specifically against human NT-proBNP was prepared successfully.

Key words: NT-proBNP, monoclonal antibodies, Enzyme-linked immunosorbent assay

刘鹏展, 黄绮玲, 何小维, 李文美, 张文琪, 张赛. NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 生物技术通报, 2016, 32(6): 148-154.

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Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Specifically Against Human NT-proBNP

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