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不同细胞系中RNA干扰抑制血管内皮生长因子表达

李铁军;康楷;宋建宁;胡瓒斓;张秉强;张才全;   

  1. 重庆医科大学附属第一医院,重庆医科大学附属第二医院,重庆市第九人民医院,重庆市第九人民医院,重庆医科大学附属第一医院,重庆医科大学附属第一医院 重庆400016,重庆400010,重庆400700,重庆400700,重庆400016,重庆400016
  • 出版日期:2007-02-26 发布日期:2007-02-26
  • 基金资助:
    国家杰出青年基金(30225026);; 国家青年科学基金(30300298)

  • Published:2007-02-26 Online:2007-02-26

摘要: 目的通过RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达,并观察在不同细胞系中,RNA干扰作用强度的变化。方法将VEGF基因作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2,通过RT-PCR观察VEGF表达受抑的程度及在不同细胞系中RNA干扰作用强度的变化。结果成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体,发现其在HEK293和HT29细胞系中,能明显抑制VEGF基因的表达,抑制率分别为72%和42%;但在Hela细胞中,抑制作用明显减低至28%;在HepG2细胞中抑制作用更弱,仅为13%。结论针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达,但在不同细胞系中的作用强度有明显差别,提示RNA干扰作用存在明显的细胞系选择性。

关键词: RNA干扰, Dicer, 小发夹样RNA(shRNA)