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枯草杆菌α-淀粉酶基因克隆及其在毕赤酵母中表达的初步研究

柳辉;杨江科;闫云君;   

  1. 华中科技大学生命科学与技术学院,华中科技大学生命科学与技术学院,华中科技大学生命科学与技术学院 武汉430074,武汉430074,武汉430074
  • 出版日期:2007-10-26 发布日期:2007-10-26
  • 基金资助:
    十五863项目(生物柴油关键技术与应用研究,2003AA214061);; 武汉市重点攻关项目

  • Published:2007-10-26 Online:2007-10-26

摘要: 以B.subtilis XL-15基因组为模板,运用PCR法成功克隆了α-淀粉酶基因,其开放式阅读框(ORF)为1980bp,编码659个氨基酸残基。分别将该基因转入大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中,进行诱导表达。结果表明,大肠杆菌破碎上清液中未检出酶活,SDS-PAGE电泳分析显示表达产物均以无活性包涵体存在;而毕赤酵母在α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,经高密度培养,表达产物分泌至胞外,发酵液酶活力为4.3U/ml,实现了B.subtilis α-淀粉酶基因的分泌表达。

关键词: α-淀粉酶, 巴斯德毕赤酵母, 基因克隆, 分泌表达