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胰蛋白酶抑制剂基因siRNA表达体系的构建

柴晓杰;吕品;张宇;王丕武;   

  1. 大连水产学院生命科学与技术学院,吉林农业大学生物技术学院,吉林农业大学生物技术学院,吉林农业大学生物技术学院 大连116023,长春130118,长春130118,长春130118
  • 出版日期:2007-12-26 发布日期:2007-12-26
  • 基金资助:
    博士基金项目(20050926)资助

  • Published:2007-12-26 Online:2007-12-26

摘要: 以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654bp,与已发表的KSTI3基因序列同源性达99%。将反义+正义基因片段插入到pBI121 35S启动子下,构建重组质粒pBIKSTI3。通过冻融法将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了siRNA表达体系。利用农杆菌介导法将带有pBIKSTI3的菌株转化大豆,从2棵再生植株中得到2 100bp的特异性扩增条带,而未转化的植株中无该片段的产生。

关键词: 胰蛋白酶抑制剂, PCR, 克隆, siRNA表达体系, 大豆