hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

胡兵;黄超;李文静;邓柳红;肖苏生;张春发;

海南大学农学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所;

出版日期:2009-12-26 发布日期:2009-12-26

Published:2009-12-26 Online:2009-12-26

摘要/Abstract

摘要： 旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。

关键词: hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原, 重叠延伸PCR, 融合蛋白表达, 纯化, 活性测定

胡兵;黄超;李文静;邓柳红;肖苏生;张春发;. hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究[J]. .

[1]	李文硕, 王林松, 杜桂彩, 郭群群, 张廷婷, 杨宏, 李荣贵. 一种松材线虫醛脱氢酶的基因克隆及其生化性质[J]. 生物技术通报, 2022, 38(9): 207-214.
[2]	覃雪晶, 王雨涵, 曹一博, 张凌云. 青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通报, 2022, 38(8): 142-149.
[3]	易芳, 来鹏程, 郑希鳌, 胡帅, 高燕丽. Kod DNA聚合酶的制备及纯化研究[J]. 生物技术通报, 2022, 38(5): 183-190.
[4]	王小琴, 黄银萍, 王蔚倩, 吴萍, 全舒. 含非天然氨基酸定点突变的MLL3_SET蛋白表达与纯化[J]. 生物技术通报, 2022, 38(3): 194-202.
[5]	杨佳慧, 孙玉萍, 陆雅宁, 刘欢, 卢存福, 陈玉珍. 拟南芥AtTERT对大肠杆菌非生物胁迫抗性的影响[J]. 生物技术通报, 2022, 38(2): 1-9.
[6]	张丰文, 周丽亚, 董超, 史延茂. 纳豆中抗氧化肽的分离纯化与活性研究[J]. 生物技术通报, 2022, 38(2): 158-165.
[7]	陈铎, 刘永哲. 新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化以及晶体优化[J]. 生物技术通报, 2022, 38(12): 149-155.
[8]	曹汝菲, 李泽轩, 许欢, 张莎, 张敏敏, 戴枫, 段晓雷. 脆弱拟杆菌Pif1解旋酶的表达纯化与晶体生长[J]. 生物技术通报, 2021, 37(9): 180-190.
[9]	田嘉慧, 封佳丽, 卢俊桦, 毛林静, 胡著然, 王莹, 楚杰. 一色齿毛菌漆酶LacT-1的分离纯化与性质研究[J]. 生物技术通报, 2021, 37(8): 186-194.
[10]	张西西, 张怡青, 李玉林, 韩笑, 王国强, 王晓军, 王旭东, 王云龙. 新型冠状病毒（SARS-CoV-2）N蛋白C端重组蛋白的原核表达、纯化及应用[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 92-97.
[11]	陈晓雨, 张建, 张新亚, 唐雨婷, 邵钰晨, 罗志丹, 卢辰. 一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 281-286.
[12]	王志新, 鲁雷震, 周景波, 封成玲, 贾紫伟, 宁亚维, 贾英民. 抗真菌肽研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(3): 206-218.
[13]	唐禄, 董丽平, 尹茉莉, 刘磊, 董媛, 王会岩. 成纤维细胞生长因子20单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 生物技术通报, 2021, 37(10): 179-185.
[14]	孟利, 杜彩萍. 大鼠His-Akt1重组蛋白的真核表达、蛋白纯化及活性鉴定[J]. 生物技术通报, 2020, 36(12): 98-103.
[15]	周阳, 王桃桃, 闫丹丹, 王莹莹, 施沁璇, 孙丽慧, 林锋. 类弹性蛋白作为功能纳米材料在生物工程领域研究及应用进展[J]. 生物技术通报, 2020, 36(11): 198-208.

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价