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带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定

赵向忠;刘明;丁丽丽;吴宁;林秀坤;   

  1. 中国科学院海洋研究所;中国科学院研究生院;
  • 出版日期:2010-08-26 发布日期:2010-08-26
  • 基金资助:
    中科院知识创新工程项目(KSCX2-YW-104,KZCX2-YW-209)

  • Published:2010-08-26 Online:2010-08-26

摘要: 构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。

关键词: p53基因, 斑马鱼, 真核表达, HeLa细胞