通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

梁燕;严建萍;谭湘陵;

南通高等师范学校;南通大学生物工程研究所;

出版日期:2011-03-26 发布日期:2011-03-26

Published:2011-03-26 Online:2011-03-26

摘要/Abstract

摘要： 克隆通育粳1号水稻乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)基因,并在原核系统中进行体外表达。取通育粳1号水稻幼根,提取总RNA,RT-PCR法扩增ADH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pGEX-4T-1表达质粒中。将质粒转化至BL21(DE3)宿主菌中,平皿培养,挑取阳性菌落培养,提取重组质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。pGEX-4T-1-ADH/BL21进行常规LB扩大培养,IPTG(1 mmol/L)作用2、3和4 h诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果显示,插入质粒中的ADH片段序列和方向正确无误,表达蛋白分子量符合预期值42 kD,表达至最大值的诱导时间为3 h。因此,该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ADH的作用和应用生物工程法大量获得ADH奠定基础。

关键词: ADH, 水稻, 克隆, 原核表达

梁燕;严建萍;谭湘陵;. 通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达[J]. .

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