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幽门杆菌Catalase/GST融合蛋白的表达、标签切除及鉴定

姜茵;奚月;李妍;   

  1. 南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所;
  • 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31070119)

  • Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要: 旨在利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签。将重组质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,Catalase/GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达在上清中。采用谷胱甘肽琼脂糖树脂Glutathione Sepharose 4B对其进行纯化,得到Catalase/GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Western blotting鉴定。高效表达出Catalase/GST融合蛋白的相对分子质量约85 kD,凝血酶成功地切除了GST标签,Western blotting证实Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别。

关键词: 幽门螺杆菌, Catalase, 融合表达, GST标签切除, 纯化